性能参数
产品详细描述
PNGase F （N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F）
产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
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PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F） |
20411ES01 |
15000 U |
763 |
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PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F） |
20411ES02 |
75000 U |
3373 |
产品描述
N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶，经过和平空间站伊丽莎菌克隆，并在 E. coli大肠杆菌中重组表达，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化。
产品性质
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中文别名（Chinese synonym） |
N-糖酰胺酶F；N-糖苷酶 F |
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英文别名（English synonym） |
PNGase F |
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来源（Source） |
大肠杆菌表达 |
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纯度（Purity） |
经SDS-PAGE及HPLC分析，纯度> 90% |
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分子量（Molecular weight） |
36 kDa |
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比活性（Specific activity） |
1,800,000 U/mg |
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缓冲液组分（Buffer） |
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol. |
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酶活定义（Unit Definition） |
1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中，37℃条件下1小时从 10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。 |
运输和保存方法
干冰运输；-20℃保存；有效期12个月。
使用方法
1、变性条件下蛋白质去糖基化：
1）将1μL 5%SDS和1μL 1 M DTT加入到12 μL目标糖蛋白（50 μg），总体积14 μL；
2）100℃温度下煮沸10 min使其变性，室温冷却5 min；
3）加入2 μL的0.5M***酸钠缓冲液（pH 7.5）。如果pH在PNGase F（pH 6-10）范围内，可以使用其他缓冲液。20 mL 0.5 M***酸钠（调制pH 7.5）的配置: 8.4 mL 1 M Na2HPO4，1.6 mL 1 M NaH2PO4 。
4）加入2 μL的10％NP-40。可用Triton X-100替代NP-40。PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反应混合物中必须加入 NP-40。
5）加入1-2 μL的PNGase，在37℃孵育1-3 h。
2、非变性条件下蛋白质去糖基化：
1）在50 mM碳酸氢铵（pH 7.8）中加入20 μg的糖蛋白至终体积为18μL；
2）加入1-2 μL的PNGase F，在37°C孵育2-18 h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。具体酶浓度见管壁标签
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
HB210129
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