Globin mRNA Depletion Probe (Human) 12806ES翌圣生物科技(上海)有限公司

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性能参数

产品名称: Globin mRNA Depletion Probe (Human) 12806ES
英文名称: Globin mRNA Depletion Probe (Human)
产品货号: 12806ES08
产品规格: 8 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 285.00元
保存与运输: 干冰运输,-20°C存放,有效期一年。
产品资料: 资料下载
更新时间: 2021/2/9 16:03:00
浏览人数:13
诚信指数:1135点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

                                                                                            

Globin mRNA Depletion Probe (Human)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格

 

Globin mRNA Depletion Probe (Human)

 

12806ES08

8 T

285.00

12806ES24

24 T

725.00

12806ES96

96 T

2655.00

产品描述

Globin mRNA Depletion Probe (Human)是针对的珠蛋白mRNA设计的探针,能够有效去除成年个体、婴儿及胚胎来源的珠蛋白mRNA,包括HBA1/2 HBBHBDHBMHBG1/2HBE1HBQ1HBZ。该产品搭配Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) (Yeasen#12253)使用,有效去除RNArRNAGlobin mRNA保留其他信使RNAmRNA)和非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA & Globin mRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成或其它下游应用。

适用范围

适用于人、小鼠、大鼠血液来源的100 ng~1 μg RNA样品;适用于完整或部分降解RNA样品。

产品组分

组分编号和名称

12806ES08

12806ES24

12806ES96

 Globin Probe (Human)

8 μL

24 μL

96 μL

运输与保存方法

干冰运输,-20°C存放,有效期一年。

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. RNA样品最大投入体积为10 μL,若样品体积较大,可先进行浓缩。

自备材料

1. RNA纯化磁珠:Hieff NGS® CleanerCat#12602)或其他等效产品。

2. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) Cat#11201)或其他等效产品;

3. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针和杂交Buffer-20 °C 取出,解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。

1.2 准备RNA样品根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至10 μL

1.3 按照表1200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

 

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL

Hybridization Buffer

3

Probe Mix(H/M/R)

1

Globin Probe(Human)

1

Total RNA

10100 ng~1 μg

Total

15

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

95℃

2 min

95℃-22℃

0.1℃/s

22℃

5 min

4℃

hold


2. RNase H消化

2.1RNase H消化试剂从-20 °C取出,解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。按照表 3 所示,配制RNase H消化反应体系。

3 RNase H消化反应体系

名称

体积(μL

RNase H Buffer

3

RNase H

2

上步产物

15

Total

20

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中,设置反应程序:(热盖关) 37℃30 min 4℃hold,进行RNase H消化反应。

3. DNase I 消化

3.1DNase I消化试剂从-20 °C 取出,解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。按照表4所示,配制DNase I消化反应体系。

4 DNase I消化反应体系

名称

体积(μL

DNase I Buffer

27.5

DNase I

2.5

上一步产物

20

Total

50

3.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

3.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中,设置反应程序:(热盖关) 37℃30min 4℃hold,进行DNase I化反应。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将 Hieff NGS® RNA Cleaner Cat#12602磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 110 μL Hieff NGS® RNA Cleaner2.2×Beads:DNA=2.2:1)至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min

4.4 PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min

4.9 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL 上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

案例展示

Human Blood Total RNA分别进行rRNA去除、rRNA&Globin 去除后建库测序,对比Globin mRNA含量。


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建库试剂盒

产品编号

规格

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产品编号

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12414/12415ES02

96×2 T

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12615/12616ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3/4

12617/12618ES04/16

12×4/12×16 T

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12610ES96

96 T

建库模块

产品编号

规格

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12609ES24/96

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12604ES24/96

24/96 T

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12605ES24/96

24/96 T

Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module

12607ES24/96

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12608ES24/96

24/96 T

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12620ES24/96

24/96 T

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12621ES03/08

24/96 T

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12250ES24/96

24/96 T

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12606ES24/96

24/96 T

文库定量

产品编号

规格

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