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SafeRed®/DuGreen® 核酸染料(10000× 水溶液)广州帝博生物科技有限公司

性能参数

产品名称: SafeRed®/DuGreen® 核酸染料(10000× 水溶液)
英文名称: SafeRed®/DuGreen® Nucleic Acid Dye (10000× aqueous solution)
产品货号: DIB013-500ul
产品规格: 500ul
产品产地: 东莞
产品商标: DIB
价    格: 咨询客服元
保存与运输: /
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2022/1/7 15:09:00
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诚信指数:9点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

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SafeRed®/DuGreen® 核酸染料(10000× 水溶液)
 
Product number          DIB013-500ul   
specification                500ul   

SafeRed®/DuGreen®核酸染料特点:
1. 带形清晰整齐:第三代SafeRed®和DuGreen®完全克服了原装国外相同染料分不开大片段DNA的缺点,所有电泳条带清晰整齐美观。
2. 安全无毒:独特油性大分子使其不能穿透细胞膜进入细胞, Ames-test实验表明,该染料的没有EB类似的诱变性。
3. 迁移率好:EB小分子很快跑出胶外,所以EB容易导致小DN**段看不清,我们的大分子SafeRed完全克服这一点。
4. 定量准确:适用于核酸分子大小的确定和定量,EB对小DN**段定量不准确。
5. 染色均匀:电泳时染色均匀,靠近负极凝胶和靠近正极端的亮度一样。EB会导致胶的整体背景稍微高些,经常出现阴   阳背景(胶的背景一部分亮一部分暗);EB长时间、长距离的电泳,EB信号强度会相应下降。我们的大分子SafeRed完全克服这一点。
6. 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
7. 稳定性高:耐热,可加在缓冲液里,100℃溶解凝胶,防止染色剂没充分混匀。适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定。
8. 耐光性强:实验室的日常光线照射环境下可以常温放置24个月。
9. 信噪比好:样品荧光信号强,背景信号低,荧光亮度是EB的十倍以上,肉眼可观测到亮度明显比EB强,EB会导致胶的整体背景稍微高些,经常出现阴阳背景。
10. 操作简单:与EB用法完全一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
11. 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
12. 完美兼容:与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。
产品包装:   SafeRed® 10000x Nucleic Acid Dye  500uL/支;    SafeGreen® 10000x Nucleic Acid Dye  500uL/支
储存条件:  室温避光可保存24个月。
 
操作步骤:
一.胶染法(推荐方法,用法类似EB)
制胶时加入SafeRed 核酸染料(染料灵敏,每100mL 琼脂糖溶液中加入10μL SafeRed 原装液即可)。 按常规方法电泳。
1. 实验室材料和试剂:
(1) 实验样品:质粒DNA,DNA marker(国产的DNA marker浓度太高,至少稀释2~3倍后使用)
(2) TBE缓冲液配置:10X TBE电泳缓冲液[Tris 107.8146g (890mM),硼酸55.0287g(890mM),EDTA 5.845g(20mM),加NaOH约4g调节pH=8.3;定容1000mL];用ddH2O稀释10倍配制1X TBE电泳缓冲液。
(3) TAE缓冲液配置:50X TAE电泳缓冲液[Tris 242g (2M),EDTA 37.2g(100mM),加醋酸约57ml调节pH=8.5;定容1000mL];用ddH2O稀释50倍配制1X TAE电泳缓冲液。
(4) 溴酚蓝指示剂,1%的西班牙琼脂糖凝胶
(5) 仪器:电泳仪(130v),移液器(0.5~10ul),凝胶成像仪
2. 实验步骤:
(1) 制胶:将0.5g琼脂糖溶于50mL 1X TBE电泳缓冲液中,加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置50℃左右加入5ul的SafeRed凝胶电泳染料,摇匀。
(2) 倒胶:将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内,避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端,距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳,切勿晃动。
(3) 置胶:待约30分钟左右胶体充分凝固后,缓慢垂直向上拔起点样梳子,切勿用力过猛。(夏季适当延长凝胶时间)
(4) 将琼脂糖凝胶放入电泳槽内,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液液面高于凝胶面约1~2mm。
(5) 将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本(1ul溴酚蓝与2ul DNA标本混合)加入到点样孔内。
(6) 盖上电泳槽盖,开启电源,使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在120~130v之间,一般可选择130V)。
(7) 当DNA条带距离点样孔约1~2cm后关闭电源,(约30~40分钟)取出凝胶。
(8) 用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
*注:此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热,制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。

优化电泳条件参考事项:
因为EB是插入DNA内部变成一个整体分子,所以不容易出现迁移/弥散的问题,而大分子的SafeRed与DNA是通过静电吸引非共价结合的,在DNA外面就容易出现条带迁移,特别是大片段DNA!
1) 鉴于SafeRed的高灵敏性,建议减少DNA的上样量。样品最佳上样量为~100ng/泳道(8泳道小胶孔)。
2) 部分国产的DNA marker浓度太高,至少稀释一倍后使用!染料过于灵敏,特别是大片段marker!目前国产的marker是基于EB染料开发的酶切的混合片段, EB显示不出来酶切的混合片段的杂带,SafeRed的高灵敏性会显示出来。少数情况下质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低, 请使用后染法。
3) 更换电泳缓冲液,新配置的电泳液效果好!建议用1×TBE缓冲液代替TAE,因为含硼酸盐的试剂导电性能更好。
4) 电泳时电压不宜过高,一般不要超过130V。与EB相比,SafeRed电泳电压要低一些,跑胶的时间长一些。
5) 染料无需低温冷藏,室温下避光储存即可,以避免沉淀;若有沉淀,将染料加热至40~50℃并充分振荡溶解,不影响使用。
6) 个别客户用染料和样品混合后,点样到琼脂糖凝胶中,不推荐这种点样法。
7) 由于GelRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,然后充分振荡以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉加热以制备琼脂糖凝胶。
8) 如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用电泳后染胶。
*此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
 
二.泡染法
(1)按照常规方法进行电泳。 用于胶回收等高浓度DNA样品强烈推荐泡染法!
(2)用H2O将SafeRed® 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl溶液中,制成3× 染色液。(例如将15μL SafeRed® 10,000× 储液加入到50mL 0.1M NaCl溶液中)。
(3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。
(4)用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
*注意事项:用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右;3× SafeRed®染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。
 
三.核酸电泳的PAGE步骤:
1)将TBE制备的凝胶放入电泳槽中,用夹子夹住边缘。
2)用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。
3)用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合,用微量移液管加入加样孔。
4)将电极与电源相连(正极接下槽),打开电源一般90V;1~8V/cm。进行电泳9h。
5)电泳至标准参照染料迁移至所需位置(一般是电泳到二甲***完全迁出,溴酚蓝距底边2~3cm停止)。关闭电源,拔掉插头,弃去电泳槽中的电泳液。
6)将凝胶取下来放入,染色皿中,加3X SafeRed的1X缓冲液中的振荡染色30-60分,放置在紫外检测即可。
*注意事项:与琼酯糖凝胶不同,不能用预染或点染的方法;只能用泡染的方法显色,由于聚丙烯酰胺比较致密,染料不容易深入,显色效果没有琼酯糖凝胶好。
特别提醒:如果用的是紫外成像仪,请选择SafeRed;如果使用激光成像仪或在可见光下观测,请选择DuGreen。

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