ONE-Glo™ + Tox 检测试剂盒普洛麦格(北京)生物技术有限公司

性能参数

产品名称: ONE-Glo™ + Tox 检测试剂盒
英文名称: ONE-Glo™ + Tox Luciferase and Cell Viability Assay
产品货号: E7110/E7120
产品规格: 1 plate/10 plates
产品产地: 美国
产品商标: Promega
价    格: 询价
保存与运输: 将 ONE-Glo™ + Tox 萤光素酶报告基因与细胞活力检测试剂盒储存于–
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更新时间: 2016/1/18 11:37:00
浏览人数:1969
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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普洛麦格(北京)生物技术有限公司
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产品详细描述

说明

 

ONE-Glo + Tox Assay (ONE-Glo + Tox 检测试剂盒)将萤光检测方法与细胞活力标记物结合起来,从而在细胞健康的环境下,更好地理解报告基因的表达情况。该试剂盒采用两步法,只需加入试剂,就可在同一平板的单一检测孔内进行这些检测,而无需进行平行检测。

该检测法的第一部分是利用 CellTiter-Fluor 细胞活力检测试剂盒(CellTiter-FluorCell  Viability  Assay )进行的非裂解性荧光检测,用于检测实验处理后细胞群落中活细胞的相对数量。 CellTiter-Fluor 细胞活力检测试剂盒检测的是活细胞蛋白酶的活性,该蛋白酶为保守的组成性表达蛋白,因而可以作为细胞活力的标志物。活细胞蛋白酶活性仅存在于完好的活细胞内,是通过一种可产生荧光并可穿透细胞的多肽底物 (glycylphenylalanyl-aminofluorocoumarin , GF-AFC) 来检测的。该底物进入完整的细胞后,被活细胞蛋白酶切割,产生荧光信号,该信号的强度与活细胞数量相关(图 1 )。当细胞膜的完整性丧失并渗漏到周围培养基中后,该活细胞蛋白酶即失活。自由的 AFC 荧光基团可用微孔板酶标仪或 CCD 成像仪来检测,激发光波长为 380–400nm ,发射光波长为 505nm 。

该试剂盒的第二部分是利用 ONE-Glo 萤光素酶检测系统(ONE-Glo Luciferase Assay System )定量萤火虫萤光素酶报告基因在所转入细胞内的表达(图 2 )。随系统提供的 ONE-Glo萤光素酶检测缓冲液(ONE-Glo Luciferase Assay Buffer )与 ONE-Glo 萤光素酶检测底物(ONE-Glo Luciferase Assay Substrate )混合得到 ONE-Glo 试剂(ONE-Glo Reagent )。 ONE-Glo Assay 含有一种新的萤光素酶底物,使得反应更稳定,对样品组分耐受性更强,比标准的萤光素酶检测试剂产生的异味更少。这些特点使得 ONE-GloAssay 的表现更强劲,并减少了高通量条件时使用其他报告基因检测试剂盒带来的操作不便。

发光信号用微孔板酶标仪或 CCD 成像仪来检测。

 

特点

 

•  高效: 在同一检测孔内检测细胞活力和萤火虫萤光素酶基因表达,得到更多细胞检测相关数据。

•  具有更好的生物学意义:在细胞活力环境下,理解报告基因的表达情况。

•  易于操作: 该检测法使用简单的“加入 - 混合 - 读数”模式(图3)。

•  灵活,易于自动化: 每个检测组分的体积都可以进行扩展,来满足高通量的需求,适于进行高达 1,536 孔板的自动化操作。

图片

 

 

(点击放大图片

 

 

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CellTiter-Fluor 细胞活力检测试剂盒的化学原理 可穿透细胞的底物进入细胞内,被有活性的活细胞蛋白酶切割产生荧光 AFC 。而在细胞膜不完整的细胞中,活细胞蛋白酶不稳定,无法切割底物。

 

 

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ONE-Glo 荧光素酶检测系统(ONE-Glo Luciferase Assay System )使用新的萤火虫萤光素酶底物, 
5´-fluoroluciferin 。

 

 

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ONE-Glo + Tox 萤光素酶报告基因与细胞活力检测试剂盒操作示意图。

 

 

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96 孔和 384 孔板中进行离子霉素滴定结果。 在 1 × 104 ( 96 孔板, A )或 5 × 103 (384 孔板, B )个细胞中表达 NFAT 应答原件,并在 PMA 存在的条件下用离子霉素进行系列滴定 6 个小时,操作方法按照技术手册的 4.B 和 4.C 部分进行。在特定的浓度下,离子霉素和 PMA 可以共同作用,激活 NFAT 依赖的基因表达。然而,更高浓度的离子霉素可产生细胞毒性,表现出细胞活力的下降(荧光);由于细胞毒性的增加,也可观察到报告基因表达(萤光素酶)活性的降低。

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