猪基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒上海钰博生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 猪基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒
英文名称: porcine Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)ELISAKit
产品货号: yb-MMP13-p
产品规格: 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
试剂级别: 试剂级
产品产地: 中国/美国
产品商标: 钰博生物/Ybscience
价    格: 询价
保存与运输: 2-8℃
现货状态: 大量
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/8/5 11:33:00
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诚信指数:2562点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海钰博生物科技有限公司
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产品详细描述

 基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒使用说明书               

 

目    的:                                             

       本试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本基质金属蛋白酶13(MMP13)的含量。

检测范围                                         

0.313-20ng/mL

最低检测限:

0.113ng/mL

基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒实验原理:

       本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪基质金属蛋白酶13(MMP13)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被抗原的微孔中依次加入基质金属蛋白酶13(MMP13),再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP酶的催化下转化成蓝色, 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶13(MMP13)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD  值),通过标准曲线计算样品中猪基质金属蛋白酶13(MMP13)浓度。

试剂盒组成:

Reagent

Quantity

标包被

12well×8strips

标准

1×0.5ml

标准品稀释液

1×1.5ml

酶标试剂

1×6ml

样品稀释液

1×6ml

显色剂A

1×6ml

显色剂B

1×6ml

终止液

1×6ml

30倍浓缩洗涤液

1×20ml×30flod

说明书

1

封板膜

2

密封袋

1

基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒样本处理及要求:

1.  血清:室温血液自然凝固  10-20  分钟,离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.  血浆:应根据标本的要求选择  EDTA  或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合  10-20  分钟后,

离心 20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.  尿液:用无菌管收集,离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.  细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心  20  分钟左右(2000-3000

/分)  。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用  PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到  100  /ml  左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.  组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的  PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保

存备用。标本融化后仍然保持  2-8℃的温度。加入一定量的  PBSPH7.4)  ,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6.  标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7.  不能检测含  NaN3  的样品,因  NaN3  抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒操作步骤:

1.  标准品:其浓度为20ng/mL贮液)。先将其稀释为20ng/mL(标准曲线最高浓度)后,再准备5个稀释标准品的EP 管,每个EP 管中加入500μL 的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成50ng/mL-25ng/mL-12.5ng/mL-6.25ng/mL-3.125ng/mL-1.5625ng/mL,依次倍比稀释仅供参考,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液

            

 

 2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)  、待

测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液  40μ l,然后再加待测样品  10μ l(样品最终稀释度为  5  倍)   。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置  37℃温育  30  分钟。

4.  配液:将  20  倍浓缩洗涤液用蒸馏水  20  倍稀释后备用。

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置  30  秒后弃去,

如此重复  5  次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂  50μ l,空白孔除外。

7.  温育:操作同  3

8.  洗涤:操作同  5

9.  显色:每孔先加入显色剂  A50μ l,再加入显色剂  B50μ l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15  分钟.

10.  终止:每孔加终止液  50μ l,终止反应(此时蓝色立转黄色)  。

11.  测定:以空白空调零,450nm  波长依序测量各孔的吸光度(OD  值)  。  测定应

在加终止液后  15  分钟以内进行。

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡  15-30  分钟后方可使用,酶标包被板开封后

如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

最好控制在  5  分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD

值大于标准品孔第一孔的  OD  值)  ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n  倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)  。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.  底物请避光保存。

7.  严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.  所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.  本试剂不同批号组分不得混用。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD  值为纵坐标,

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的  OD

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释

倍数;或用标准物的浓度与  OD  值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的  OD  

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释

倍数,即为样品的实际浓度。

(此图仅供参考)

基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒特异性

本试剂盒用于检测基质金属蛋白酶13(MMP13),经检测与其它相似物质无明显交叉反应。

由于受到技术及样本来源的限制,不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测,因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的猪基质金属蛋白酶13(MMP13)(加标样品),重复测定并计算其均值,回收率为测定值与理论值的比率。

        样本

      回收率范围

    平均回收率(%)

      血清(n=5)

        86-98

          93

   EDTA血浆(n=5

        91-103

          96

   肝素血浆(n=5

        84-96

          90

 

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的猪基质金属蛋白酶13(MMP13),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 的待测样本,线性范围即为稀释后样本中猪基质金属蛋白酶13(MMP13)含量的测定值与理论值的比率。

样本

12

14

18

116

血清(n=5)

83-95%

85-97%

93-107%

85-99%

EDTA血浆(n=5

95-105%

91-102%

89-99%

93-104%

肝素血浆(n=5

87-101%

84-98%

91-103%

88-96%

精密度

精密度用样品测定值的变异系数 CV 表示。CV(%) = SD/mean×100批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定 20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定 8 次,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒稳定性

经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于 5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少猪为误差。

实验流程

1、实验前标准品、试剂及样本的准备;

2、加样(标准品及样本)100μL37oC孵育2小时;

3、吸弃,加检测溶液A100μL37oC孵育1小时;

4、洗板3次;

5、加检测溶液B100μL37oC孵育30分钟;

6、洗板5次;

7、加TMB底物90μL37oC孵育1525分钟;

8、加终止液50μL,立即450nm读数。

基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数  R  值为  0.990  以上。

2.批内与批见应分别小于  9%和  11%

3.保存条件及有效期:

a.试剂盒保存:2-8℃。

b.有效期:6  个月

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