人NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒-免疫学检测-试剂-生物在线
人NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒

人NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒

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产品名称: 人NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒

英文名称: human NFKB Repressing Factor (NKRF) ELISA Kit

产品编号: HZ-NKRF-Hu

产品价格: 0

产品产地: 美国/加拿大/中国

品牌商标: HZbscience

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

上海沪震实业有限公司
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                                                                          96T       仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中人NFKB抑制因子(NKRF)含量。

检测范围

0.313-20ng/mL此检测范围仅供参考,可根据您的要求定做.

最低检测限

0.126ng/mL 

实验原理

本酶联免疫吸附测定ELISA试剂盒运用采用双抗体夹心ELISA法。用抗人NFKB抑制因子(NKRF)抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人NFKB抑制因子(NKRF)与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人NFKB抑制因子(NKRF)抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人NFKB抑制因子(NKRF)抗体与结合在包被抗体上的人NFKB抑制因子(NKRF)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人NFKB抑制因子(NKRF)浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人NFKB抑制因子(NKRF)的浓度。具体参照各指标试剂盒相应的使用说明书。

试剂盒内容

试剂名称

数量

试剂名称

数量

96孔板(预包被)

1

96孔板覆膜

2

标准品

0.5ml×1

标准品稀释液

1.5ml×1

显色剂A

6ml×1

样品稀释液

6ml×1

显色剂B

6ml×1

终止液

6ml×1

酶标试剂

6ml×1

密封袋

1

浓洗涤液(30×)

1×20mL

使用说明书

1

NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒需自备的设备及试剂

1.         450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

2.         单道或多道微量加液器及吸头

3.         稀释样品的EP

4.         蒸馏水或去离子水

5.         吸水纸

6.         盛放洗液的容器

试剂盒的储存及有效期

1.         未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液,终止液保存于4℃,其他试剂保存于-20℃。

2.         使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。

注意:

试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。

NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒标本的采集与保存

1.         血清

将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20oC -80oC 保存,但应避免反复冻融。

2.         血浆:

 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC-80oC 保存,但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆:

1) 取适量组织块,于预冷PBS0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);

2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2次)。

3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。

4. 细胞裂解液:

1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);

2)将收集到的细胞用冷PBS 3 次;

3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):

i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。

ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。

4)将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟,收集上清备用。

5. 细胞培养上清或其它生物标本:

 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC -80oC 保存,但应避免反复冻融。

注意:

1.         以上标本均需密封保存4oC保存应小于1周,-20oC不应超过1个月,-80oC不应超过2个月。

2.         标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

3.         实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

NFKB抑制因子(NKRF)ELISA试剂盒试剂准备

1.         使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2.         标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为20ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图依次倍比稀释成不同的梯度,20ng/mL-10ng/mL-5ng/mL-2.5ng/mL-1.25ng/mL-0.625ng/mL, 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

 

 

3.         浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。

标本处理

1.         本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。

2.         实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

3.         若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。

4.