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乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)试剂盒

乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)试剂盒

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产品名称: 乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)试剂盒

英文名称:

产品编号: BC0681

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产品产地: 北京/中国

品牌商标: solarbio

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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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 乳酸脱氢酶(Lactate DehydrogenaseLDH)试剂盒说明书

分光光度法 50/24

BC0681-100管/48样 Solarbio 100管/48样 600.00元

产品简介:

LDHEC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二**苯肼作用生成丙酮酸二**苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容:

提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;

试剂一:液体15 mL×1瓶, 4℃保存; 

试剂二:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用,配好后-20 ℃保存,可保存两周,禁止反复冻融;

试剂三:液体15 mL×1瓶,4℃保存; 

试剂四:液体50 mL×1瓶,4℃保存;

操作步骤:

一、样品测定的准备:   

1. 细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500-1000:1 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆;8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

3. 血清(浆)样品:直接检测。

二、测定操作:

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至450nm,蒸馏水调零。

2. 样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

50

50

试剂一

250

250

试剂二

50

 

蒸馏水

 

50

充分混匀,37(哺乳动物)或25(其它物种)水浴15min

试剂三

250

250

充分混匀,37(哺乳动物)或25(其它物种)水浴15min

试剂四

750

750

充分混匀,室温静置3min450 nm下测定吸光度计算ΔA=A测定管-A对照管每个测定管需要设一个对照管。

LDH活力单位计算:

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.725x   (x标准品浓度μmol/mLy为对吸光度)

2、血清(浆)LDH活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHU/mL=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA

3细胞、细菌和组织中LDH活力的计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHU/mg prot=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDHU/g鲜重=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×TUNEology 波长可调检测卡盒-->