pHyVec5载体选择主要考虑下述3点：

【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

【2】.载体的类型：

（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。

（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。

（3）对原核表达载体应该注意3点：

①pHyVec5选择合适的启动子及相应的受体菌；

②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；

③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。

【3】载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。

pHyVec5选用质粒（最常用）做载体的4点要求：

①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；

②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。

③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；

④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。

pHyVec5无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。XY90903 无RNase的DNase溶液 300U

XY90904 膜结合DNA清除试剂盒 50次

XY60204 非酶多糖清除剂(RNA专用) 10mL

XY100802 重蒸酚 100mL

XY3190 水饱和酚 100mL

XY3191 Tris饱和酚 100mL

XY100803 酸酚 100mL

XY100804 氯仿-异戊醇混合液 100mL

XY100805 酚-氯仿-异戊醇混合液 100mL

XY100935 超纯水 100mL

XY60604 DEPC水 100mL

XY80403 RNase-free水 10mL

XY71207 RNA洗脱液 50mL

蛋白质研究

XY80807动物细胞裂解液50mL(A)|50mL(B)XY131006RIPA裂解液(强)100mLXY131007RIPA裂解液(中)100mLXY131008RIPA裂解液(弱)100mLXY131009NP-40裂解液100mLXY90707动植物总蛋白微量提取试剂盒50次XY91204动植物膜蛋白微量制备试剂盒50次XY90613动物细胞核蛋白微量制备试剂盒25次|100次XY91203一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒30次|100次XY121208液体样品蛋白纯化回收试剂盒50次XY81218植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE)30次XY81219植物总蛋白质微量提取试剂(2DE)30次|100次XY81202真菌总蛋白质微量提取试剂盒50次XY90902细菌总蛋白质微量提取试剂盒30次XY100929细菌膜蛋白质微量提取试剂盒50次XY131064细胞表面蛋白分离试剂盒8次XY131066磷酸化蛋白富集试剂盒10次XY131067ConA 糖蛋白分离试剂盒10次XY131205WGA 糖蛋白分离试剂盒10次XY90508包涵体微量纯化试剂盒20次XY90509包涵体中量纯化试剂盒5次XY90510包涵体大量纯化试剂盒2次XY131121蛋白折叠试剂盒100次XY100302包涵体蛋白溶解及复性套装100次XY100102一站式His标记蛋白质微量纯化套装20次(A)|20次(B)XY100101镍柱介质2mL|10mLXY131057钴柱介质10mLXY120801镍柱原位再生试剂盒20次XY100202兔抗His标签多抗，HRP标记100μLXY111116一站式GST标记蛋白质微量纯化套装20次(A)|20次(B)XY120101谷胱甘肽琼脂糖2mLXY120705L-谷胱甘肽(还原型)5gXY120534兔抗GST标签多抗20μLXY120535HRP标记的兔抗GST标签多抗20μLXY130871一站式MBP标签蛋白纯化套装20次XY130573小鼠抗His标签单抗100μLXY130574小鼠抗Flag标签单抗100μLXY130575小鼠抗c-Myc标签单抗100μLXY130576小鼠抗HA标签单抗100μLXY130577小鼠抗GST标签单抗100μLXY130578小鼠抗V5标签单抗100μLXY130579小鼠抗MBP标签单抗100μLXY130580小鼠抗GFP标签单抗100μLXY130581小鼠抗mCherry标签单抗100μLXY130582小鼠RFP标签单抗100μLXY130583小鼠抗VSV-G标签单抗100μLXY130584小鼠抗T7标签单抗100μLXY130585小鼠抗CBP标签单抗100μLXY130586小鼠抗HSV标签单抗100μLXY130587小鼠抗E2标签单抗100μLXY130588小鼠抗S1标签单抗100μLXY130589小鼠抗Tag-100标签蛋白单抗100μLXY130590小鼠抗HPC4标签蛋白单抗100μLXY130591小鼠抗SUMO标签蛋白单抗100μLXY130592HRP标记内参抗体30μLXY131202即用型GFP标签蛋白裂解液100uLXY130413肝素琼脂糖5mL|50mLXY130417蓝胶琼脂糖5mL|50mLXY130421DEAE交换介质50mLXY130423Q交换介质50mLXY130422CM交换介质50mLXY130424SP交换介质50mLXY131020Sephacryl S-400基质10mLXY130425苯基介质50mLXY130426丁基介质50mLXY130427丁基硫介质50mLXY130418Protein A琼脂糖1mLXY130420Protein G琼脂糖1mLXY131201Protein A+G琼脂糖2mLXY100939福林酚试剂100mLXY90610卵白蛋白标准品1mLXY131070牛血清白蛋白标准品1mLXY131071牛血清γ 球蛋白标准品1mLXY131072预稀释BSA 蛋白标准品1mLXY131220预稀释BGG 蛋白标准品1mLXY131074SDS-PAGE 样品预处理试剂盒50次XY131122考马斯亮蓝R-25010gXY131123考马斯亮蓝G-25010gXY131078天然蛋白A1mgXY131079重组蛋白A1mgXY131080重组蛋白G1mgXY131081重组蛋白A/G1mgXY131082重组蛋白L1mgXY131075糖蛋白染色试剂盒10次XY131076磷酸蛋白染色试剂盒10次XY131077组氨酸标签蛋白染色试剂盒10次XY80814Bradford法蛋白定量试剂盒100mL|200mLXY80815BCA法蛋白定量试剂盒500次XY80816超敏型BCA法蛋白定量试剂盒500次XY131069还原剂兼容型BCA蛋白定量试剂盒250次XY101102改良Lowry法蛋白定量试剂盒1000次XY80808蛋白酶抑制剂混合液2×0.5mLXY80809蛋白磷酸酶抑制剂混合液11mLXY130525蛋白磷酸酶抑制剂混合液25mLXY130526细菌专用蛋白酶抑制剂10mLXY130527哺乳动物专用蛋白酶抑制剂1mLXY130528植物专用蛋白酶抑制剂1mLXY130529酵母专用蛋白酶抑制剂5mLXY130530His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂10mLXY130531组织培养专用蛋白酶抑制剂1mLXY130543α2巨球蛋白25Inh.UXY130544AEBSF溶液5mLXY130534抗凝血酶Ⅲ溶液1mLXY130535APMSF溶液1mLXY100834胰蛋白酶抑制剂溶液10mLXY130536抑氨肽酶溶液5mLXY130537钙蛋白酶抑制剂Ⅰ溶液10mLXY100538钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液10mLXY100539胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液1mLXY130540二氯异香豆素溶液10mLXY130541E-64蛋白酶抑制剂溶液10mLXY100837EDTA溶液,0.5M,蛋白级10mLXY130532EGTA溶液10mLXY130542水蛭素溶液2000ATUXY100836亮抑蛋白酶肽溶液1mLXY130533木瓜蛋白酶抑制剂溶液10mLXY100835胃蛋白酶抑制剂溶液1mLXY130545膦酰二肽溶液10mLXY100833PMSF溶液5mLXY131043CHAPS5gXY131044辛甲基β 葡糖苷1gXY131045辛甲基硫吡喃葡萄糖苷5gXY131046n-十二烷基-β-D-麦芽糖苷1gXY131047脱氧胆酸钠5gXY131048胆酸钠5gXY131049十二烷基磺酸钠100gXY131050去垢剂去除树脂10mLXY131051十二烷基磺酸钠清除剂25mLXY131052β- 巯基乙醇，蛋白级10mLXY131053蛋白级DTT5gXY131054免称量蛋白级DTT48管XY131055TCEP 盐酸膦1gXY131056TCEP 溶液5mLXY131120盐酸胍溶液200mLXY131222咪唑溶液100mLXY131058咪唑25gXY131059亚氨二乙酸介质10mLXY131061谷胱甘肽S 转移酶1mgXY81216核酸清除剂1.5mLXY81029非变性法蛋白沉淀试剂盒10次XY81217微量蛋白沉淀试剂盒50次XY61205血清白蛋白清除剂15次XY100915SDS-PAGE预制胶12块XY80810一站式SDS-PAGE电泳套装30次XY100867SDS-PAGE浓缩胶配胶液500mLXY100868SDS-PAGE分离胶配胶液500mLXY81204SDS-PAGE上样液10mLXY81203SDS-PAGE电泳液5L|20LXY100908一站式长效期SDS-PAGE电泳套装30次(A)|30次(B)XY100909长效期SDS-PAGE配胶液200mLXY100910长效期SDS-PAGE还原剂10mLXY100911长效期SDS-PAGE上样液1mLXY100912长效期SDS-PAGE电泳液(干粉)20L(A)XY81205一站式Tricine-SDS-PAGE套装30次XY81225Tricine-SDS-PAGE配胶液250mL|1000mLXY81213Tricine-SDS-PAGE上样液1mL|5mLXY81214Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液(干粉)10L|50LXY81226Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液(干粉)10L|50LXY81212一站式蛋白非变性PAGE套装30次(A)|30次(B)|30次(C)XY100828高pH缓冲液套装30次XY100829中pH缓冲液套装30次XY100830低pH缓冲液套装30次XY70102蛋白质电泳分子量标准15次(A)|20次(B)|10次(C)XY70704预染蛋白质电泳分子量标准10次(A)|10次(B)XY90402蛋白胶微量回收试剂盒50次XY90403蛋白胶中量回收试剂盒5次XY80812考马斯亮蓝染液250mLXY61204一步式PAGE染液10次XY111203绿如蓝蛋白染液250次XY100810超快蛋白银染试剂盒1000mLXY100811质谱兼容型蛋白银染试剂盒10次XY100603银染清除剂30次XY81215一站式Western印迹套装(显色法)20次(A)|20次(B)XY131104Western 封堵液500mLXY131105酪蛋白封堵液100mL(A)|100mL(B)XY131236牛血清白蛋白封堵液250mLXY131109Tris 缓冲盐溶液(TBS)10包XY131112氯萘酚溶液50mLXY131114ABTS 溶液50mlXY131115OPD 干粉25gXY131116pNPP 干粉1gXY131108ONPG 干粉1gXY101122尼龙膜1张XY101123PVDF膜1张XY81206氨基黑染膜液250mLXY100924丽春红S染膜液250mLXY100928湿法电转液(干粉)20LXY81207半干法电转液(干粉)20LXY100878Western印迹膜封膜液100mLXY81208印迹膜抗体稀释液100mLXY80813Western印迹膜抗体清除剂50mL|200mLXY1008315-溴-4-氯-3-吲哚磷酸100mgXY100832四氮唑蓝250mgXY81224BCIP/NBT显色试剂盒100mLXY100214预混型BCIP/NBT溶液100mLXY81223增强型DAB显色试剂盒100mLXY101106沉淀型TMB显色试剂盒100mLXY91101一管式 TMB 显色液100mL(A)XY120201超敏化学发光(HRP)检测试剂盒25mL|250mLXY131192超敏化学发光(AP)检测试剂盒25mLXY131142鲁米诺1gXY131143AMPPD100mgXY131118乙烯乙二醇200mLXY131119HRP 稳定剂/ 稀释剂200mLXY130565β-Actin小鼠单抗30μLXY130566α-Actin小鼠单抗30μLXY130567β-Tubulin小鼠单抗30μLXY130568α-Tubulin小鼠单抗30μLXY130569GAPDH小鼠单抗30μLXY130570植物Actin小鼠单抗30μLXY130571组蛋白3.1小鼠单抗30μLXY130572COX IV兔单抗20μLXY131144山羊抗小鼠IgG(H+L),碱性磷酸酶标记100μLXY131145山羊抗兔IgG(Fc)，碱性磷酸酶标记100μLXY131146山羊抗人IgG(H+L)，碱性磷酸酶标记100μLXY131147山羊抗大鼠IgG(H+L)，碱性磷酸酶标记100μLXY131148驴抗山羊IgG，碱性磷酸酶标记60μLXY131149山羊抗兔IgG(H+L)，辣根过氧化物酶标记300μLXY131150山羊抗小鼠IgG(H+L)，辣根过氧化物酶标记300μLXY131151山羊抗人IgG(H+L)，辣根过氧化物酶标记300μLXY131152兔抗鸡IgY，辣根过氧化物酶标记300μLXY131153驴抗山羊IgG，辣根过氧化物酶标记60μLXY131154山羊抗小鼠IgG，荧光素488标记0.1mgXY131155山羊抗小鼠IgG，荧光素555标记0.1mgXY131156山羊抗兔IgG，异硫*酸荧光素标记0.1mgXY131157藻红蛋白标记山羊抗兔IgG0.1mgXY131158荧光素488标记山羊抗兔IgG0.1mgXY131159荧光素555标记山羊抗兔IgG0.1mgXY131160异硫*酸荧光素标记山羊抗小鼠IgG0.1mgXY131161山羊抗小鼠IgG，藻红蛋白标记0.1mgXY100841β-巯基乙醇1.5mLXY100881SDS溶液(10%,电泳级)100mLXY90311电泳级Tricine干粉100gXY111007MALDI蛋白样品处理试剂盒500次

工具酶