D2300 真菌基因组DNA提取试剂盒北京索莱宝科技有限公司

金牌供应商

性能参数

产品名称: D2300 真菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称: Fungi Genomic DNA Extraction Kit
产品货号: D2300
产品规格: 50T
试剂级别: 生化级
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三层
产品商标: Solarbio
价    格: 400元
保存与运输: 室温(15℃-25℃) 干燥保存,2℃-8℃保存时间更长
现货状态: 现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2018/6/22 15:23:00
浏览人数:194
诚信指数:875点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司
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北京市通州区马驹桥镇联东U谷景盛南四街15号85A三层
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产品详细描述

 

北京索莱宝科技有限公司  张净花  13426459985

真菌基因组DNA提取试剂盒

品牌:Solarbio | 货号:D2300
  • 英文名称 : Fungi Genomic DNA Extraction Kit
  • 储存条件 : 室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
  • 单位 : 盒
 

 

 

 

商品货号: 商品品牌: 规格 基本售价: 选择规格
D2300-50T Solarbio 50T 400.00元
D2300-100T Solarbio 100T 700.00元

产品介绍

货号:D2300

规格:50T/ 100T

保存:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2℃-8℃保存时间更长 。

试剂盒内容:                              D2300-50T                       D2300-100T

                      RNase A                    1ml                                    1ml×2

                     蛋白酶 K                     1ml                                     1ml×2

                     玻璃珠                          6g                                       11g

                     溶液 A                           10ml                                  20ml

                     溶液 B                           10ml                                  20ml

                     漂洗液                           15ml                                 15ml×2

                     洗脱液                           10ml                                  20ml

                     吸附柱                           50 个                                 100 个

                     收集管                           50 个                                 100 个

                     说明书                           1 份                                    1 份

产品简介:

真菌是具有真核和细胞壁的异养生物,种属很多,已报道的属达 1 万以上,种超过 10 万个。真菌通常又分为

三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌) 。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用

液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA,可以直接用于

PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。

操作步骤:

使用 前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在

室温下离心。

1、样品的处理:

1)对于酵母菌,取 1-2ml 培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入 200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加

入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5-10min。

2)霉菌(孢子也可相同处理):取 50-100mg 菌丝,加 200ul 溶液 A,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入

20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 30min。

3)大型真菌(如蘑菇等) :称取 50-100mg 样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复 3 次,使样品研成粉末(如

无液氮,可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器适当研磨) ,加 200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃

珠,在高速振荡器上振荡,约 5min。

2、 加入 20ul 的蛋白酶 K (10mg/ml) , 充分混匀, 55℃水浴消化 30min, 消化期间可颠倒离心管混匀数次。 12000rpm

离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。

3、在上清中加入 200ul 溶液 B,充分混匀。如出现白色沉淀,可放 55℃水浴 5min,沉淀即会消失,不影响后续

实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

4、再加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,将溶液和絮状沉淀都加

入吸附柱中,放置 2 分钟。

5、12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附

柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则

漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

9、 将吸附柱放入一个干净的离心管中, 向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液, 室温放置 5min,

12000rpm 离心 1min。

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。

注意事项:

1. 由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶 K 处理,一般都可

以得到一定量的基因组 DNA,如电泳检测很弱,一般 PCR 都会有较好结果。

2. 若溶液 A 或溶液 B 中有沉淀,可在 55℃水浴中重新溶解。

3. 如果 DNA 提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取 DNA 成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。

4. 洗脱缓冲液的体积*好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要

用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围),pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;

DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。

5. DNA 浓度及纯度检测:得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回

收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD 260 处有显著吸收峰,

OD 260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA、40 μg/ml 单链 DNA。OD 260/ OD 280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不

使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

6. 在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出 DNA,请将部分样品寄至我公司,我们代为摸索优

化条件,以使您的实验能够正常进行下去。

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