即用型培养基的配制和灭菌操作步骤：

以1000ml“MS 3.0mg/lNAA 0.5%（即5g/l）琼脂 3%（即30g/l）蔗糖”为例。

第一步：准备好配制培养基的一切用具和试剂。

第二步：称量5g琼脂和30g蔗糖，溶解在大约所要配制培养基2/3~3/4左右体积（约600~750ml）的（蒸馏）水中，加热溶解，不时搅拌，避免出现琼脂生块和泡沫。

第三步：Acidithiobacillus medium根据用量，用量简或移液管从母液中取出所需量的大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素（每做1000ml培养基，取20ml大量成分、20ml氯化钙母液、10ml微量成分、10ml铁盐母液和10ml有机成分，以及3.0mgNAA），放入预先有少量蒸馏水的烧杯中（以免加药液时溅出），然后加入琼脂和糖水溶液中搅拌混匀。

第四步：加水定容。待搅拌均匀后，用数滴稀碱（NaOH）将pH值调节到预定水平（一般为pH5.8），当pH值偏碱时用稀酸（HCl）调节。用pH试纸或酸碱指示（或pH）计测定培养基的pH值。

第五步：将Acidithiobacillus medium用漏斗分装到培养容器中。每瓶加15~20ml左右，之后加盖。

第六步：即用型培养基进行灭菌。高压蒸气灭菌锅的温度为121℃，灭菌15~20分钟。培养基常用高温高压（1.06kg/cm2或0.1MPa，121℃）蒸气灭菌的方法，灭菌时间应根据培养瓶体积大小及其内培养基容量多少而定。体积和容量越大，所需灭菌时间就越长。空试管、空三角瓶和滤纸要在130℃下灭30分钟或121℃灭60分钟。空的培养容器不应同盛装培养基的培养容器一起高压蒸气灭菌，不同体积培养容器或盛装不同容量的培养基也不能一起高压蒸气灭菌，而应该分别进行。因为热穿透力是一个需要考虑的因素，体积大的培养容器需要较长的时间灭菌，是因为热量穿透大体积培养基要比体积小的花更多的时间。

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