无内毒素质粒中量提取试剂盒上海同科生物科技有限公司

性能参数

产品名称: 无内毒素质粒中量提取试剂盒
英文名称: Endo-Free Plasmid Midi Kit
产品货号: TB50008A
产品规格: 20 rxns
试剂级别: 分子生物学级
产品产地: USA
产品商标: Tonk Bioscience LLC
价    格: 1611元
保存与运输: 本产品在常温(15-25℃) 干燥条件下可保存12个月。
现货状态: 现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2018/7/29 13:19:00
浏览人数:252
诚信指数:87点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

产品名称无内毒素质粒中量提取试剂盒

英文名称:Endo-Free Plasmid Midi Kit

包装规格

 

产品编号

产品规格

价格

TB50008A

20 rxns

1611





有效期:
本产品常温(15-25℃) 干燥条件下可保存12个月。

产品原理和特点:

本产品使用无胍盐质粒纯化方法,最高可以获得高纯度的质粒200 μg操作方便;过滤柱除去内毒素,使内毒素浓度<0.1 EU/μg;没有盐离子残留,提高测序、连接、转化、转染和酶反应效率。

无内毒素质粒中量提取试剂盒使用前准备事项:

1、使用本产品前,请务必仔细阅读说明书;

2、EFW(70%乙醇)在首次使用前加入154 mL无水乙醇,混匀后使用;

3、Buffer RA在首次使用前加入RNase A,2-8℃保存。

4、检查Buffer RB 有无沉淀。如有混浊现象可在37 ℃水浴中加热至澄清

5、全部操作均室温进行,低温离心不利于酶去除 RNA

6、从步骤“11”起,使用新的无内毒素的枪头转移液体并小心操作,可避免引入新的内毒素污染物。

无内毒素质粒中量提取试剂盒操作步骤:

1、取大肠杆菌过夜培养液 10~50 mL8,000rpm室温离心 5 min,弃上清收集菌体

2、菌体中加入溶液 RA 1.6 mL涡旋振荡,充分混悬菌体不要残留菌块,会影响质粒得率和纯度)。

3、加入溶液 RB 1.6 mL立即温和上下颠倒5-7次,使之充分混匀,室温静置 3 min,形成透明溶液

*不操作不可剧烈,以免震断细菌基因组DNA;也不可超过5 min,以免破坏质粒完整性。

4、加入溶液 RC 1.6 mL立即温和地上下颠倒 5~7 次使之充分混匀(溶液存在发粘拉丝现象说明未充分混匀)。加入 0.8 mL 无水乙醇,颠倒混匀。8,000 rpm室温离心5 min。

5、将上清全部转移至套有过滤柱的结合柱中。8,000 rpm 室温离心 2 min,弃滤液

*若上清液较多,可分多次转移离心

6、结合柱放回,向结合柱内5 mL 80%乙醇(自备)8,000 rpm室温离心5 min,弃滤液

7、结合柱放回,向结合柱内5 mL无水乙醇(自备),8,000 rpm室温离心2 min,弃滤液

8、结合柱放回8,000 rpm室温5 min以除去结合柱内残留液体。

9、结合柱放入新的15mL离心管中敞口室温放置5~10 min 使乙醇充分挥发

*残留乙醇将严重影响 DNA 洗脱。

10、结合中加1.5 mL Elution Buffer室温静置2~3 min,8,000 rpm室温离心2 min结合柱。

*Elution Buffer预热至60 ℃左右,可以增加洗脱效率

11、向洗脱液中加入Buffer RE 1.5 mL,颠倒混匀,室温静置5 min。

12、加入Buffer NE 1 mL,颠倒混匀,并移入Endo-free过滤柱中,静置5~10 min。10,000 rpm室温离心2 min弃过滤柱。

*静置5~10 min可使絮状物分层,利于过滤。弃过滤柱前,确认无液体残留,否则再次离心过滤。

13、向滤液中加入等体积的异丙醇(或者两倍体积的无水乙醇,自备),颠倒混匀后室温放置15 min,10,000 rpm离心15 min弃上清。

14、加入4 mL EFW(70%乙醇)洗涤沉淀,10,000 rpm室温离心5 min弃上清。

15、重复步骤“14,尽可能弃上清。

16、敞口放置 5~10 min,使乙醇挥发,用适量EFW溶解沉淀。

无内毒素质粒中量提取试剂盒常见问题解析:

质粒得率低可能原因及解决办法:

1、菌体未活化,生长效率低,菌量少需要活化菌种

2、属于低拷贝质粒。增加菌液的量

3、Buffer RB 裂解不充分。

质粒纯度差可能原因:

1、未加入RNase A 或RNase A未4 ℃保存

2、加入Buffer RB 剧烈震荡,使得基因组断裂

3、加入Buffer RC 操作慢,形成微小沉淀,蛋白质无法被充分漂洗干净

4、OD260/OD280 比值一般在 1.8-2.0 之间,小于 1.8 可能有蛋白污染,大于 2.0 有部分降解或 RNA 污染。

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