大肠杆菌HMS174（DE3）菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌HMS174（DE3）菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌HMS174（DE3）菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌HMS174（DE3）菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC756 RECS 大鼠软骨肉瘤细胞 大鼠 EMEM 贴壁

EC807 RL 人B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC757 DECS 人树突状细胞 人 DMEM 贴壁

EC758 3LL 小鼠肺癌细胞 小鼠 DMEM 贴壁+悬浮

EC769 VMM5A 人黑色素瘤细胞 人 1640 贴壁

EC770 VMM39 人黑色素瘤细胞 人 1640 贴壁

EC759 A10 大鼠主动脉平滑肌细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC771 SNU449 人肝癌细胞 人 1640 贴壁

EC808 HUEC 人尿道上皮细胞 人 1640 贴壁

EC772 HHFK 人毛囊角质细胞 人 IMDM 贴壁

EC809 ECEL 鸡胚肝细胞 鸡 DMEM 贴壁

EC773 JS1 小鼠肝星形细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC781 ECattle EChondroECytes 牛软骨细胞 牛 DMEM/F12 贴壁

EC780 BMEEC 大鼠脑微血管内皮细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC823 OECI-AML5 人急性髓细胞性白血病细胞 人 IMDM 悬浮

EC810 HBSMEC 人支气管平滑肌细胞 人 DMEM 贴壁

EC774 SDBMSEC SD大鼠骨髓间充质干细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC775 SNB19 人胶质母细胞瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC776 SK-LU-1 人低分化肺腺癌 人 EMEM 贴壁

EC777 NECI-H647 人非小细胞肺癌细胞 人 1640 贴壁

EC778 HAEEC 人主动脉内皮细胞 人 1640 贴壁

EC811 WRL68 人正常肝细胞 人 1640 贴壁

EC782 U266B1 人外周血B淋巴细胞 人 1640 悬浮