大肠杆菌Origami (DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌Origami (DE3)菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Origami (DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌Origami (DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC986 BERH-2 大鼠肝癌细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC987 LMH 鸡肝细胞 鸡 DMEM 贴壁

EC988 SNK1 人NK/T细胞淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC989 ECBRH7919 大鼠肝癌细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC990 D341Med 人髓母细胞瘤细胞 人 1640 悬浮

EC991 SNK8 人NK/T细胞淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC992 TOV-21G 人卵巢癌细胞 人 1640 贴壁

EC993 F9 小鼠畸胎瘤细胞 小鼠 EMEM 贴壁

EC994 IBRS-2 猪肾细胞 猪 DMEM 贴壁

EC995 U-ECH1 人脊索瘤细胞 人 EMEM 贴壁

EC996 IEEC-18 大鼠回肠细胞 大鼠 MECECoy’s 5a 贴壁

EC997 mREEC 小鼠视网膜内皮细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC998 MONO-MAEC-1 人急性白血病细胞 人 1640 悬浮

EC999 DU4475 人乳腺癌细胞 人 1640 悬浮

EC1000 MV3 人黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC1001 MDA-MB-175-VII 人乳腺癌细胞 人 L15 贴壁

EC1002 HECEC2185 人乳腺转移性小叶癌细胞 人

EC1003 OKT3 总T淋巴细胞 1640 悬浮

EC1004 ECEM-EC7 人外周血急性淋巴细胞白血病细胞 人 1640 悬浮

EC1005 ES2 人卵巢透明细胞癌细胞 人 MECECoy’s 5a 贴壁

EC1006 ECECEC-HIE-2 人胚胎肠粘膜来源细胞 人 1640 贴壁

EC1007 OKT3 小鼠ECD3杂交瘤细胞 小鼠 IMDM 半贴壁

EC1008 G-Olig2 小鼠胚胎干细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC1009 LN299 人胶质瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC1010 NE-4EC 小鼠神经干细胞 小鼠 EMEM 贴壁