大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC196 U-87 MG 人脑星形胶质母细胞瘤 人 EMEM 贴壁

EC197 ES-2 人卵巢透明细胞癌 人

EC198 SK-OV-3 人卵巢癌细胞 人 McCoy’s 5a 贴壁

EC199 AsPC-1 人转移胰腺腺癌细胞 人 1640 贴壁

EC200 BxPC-3 人原位胰腺腺癌细胞 人 1640或DMEM 贴壁

EC201 CFPAC-1 人胰腺癌细胞 人

EC202 PANC-1 人胰腺癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC203 SW 1990 人胰腺癌细胞系 人

EC204 Detroit 562 人咽头癌胸水转移细胞 人

EC205 FaDu 人咽鳞癌细胞 人

EC206 22RV1 人前列腺癌细胞 人 1640 贴壁

EC208 LNCaP clone FGC 人前列腺癌细胞 人

EC209 PC-3 人前列腺癌细胞 人 F12 贴壁

EC210 AGS 人胃腺癌细胞 人 F12K 贴壁

EC211 HGC-27 人胃癌细胞（未分化） 人 1640 贴壁

EC212 KATO III 人胃癌细胞 人 1640 贴壁+悬浮

EC213 NCI-N87 [N87] 人胃癌细胞 人

EC214 SNU-1 人胃癌细胞 人

EC215 SW 982 [SW-982, SW982] 人滑膜肉瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC216 SW579 [SW 579; SW-579] 人甲状腺鳞癌细胞 人 L15 贴壁

EC217 TT 人甲状腺导管癌细胞 人 F12K 贴壁

EC218 HCC 94 [HCC941122] 人子宫鳞癌细胞（高分化） 人

EC219 HEC-1-A 人子宫内膜腺癌细胞 人 McCoy’s 5a 贴壁

EC220 HEC-1-B 人子宫内膜腺癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC221 RL95-2 人子宫内膜癌细胞 人

EC222 Y1 小鼠肾上腺皮质瘤细胞 小鼠

EC223 S-180 小鼠腹水瘤细胞 小鼠