喹诺酮检测试剂盒上海研谨生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 喹诺酮检测试剂盒
产品货号: YJ2149
产品规格: 96孔/盒
试剂级别: 试剂级
产品产地: 中国
产品商标: YOYOBIO
价    格: 2200元
保存与运输: 低温
现货状态: 大量现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/3/13 11:00:00
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上海研谨生物科技有限公司
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产品详细描述

喹诺***类快速检测试剂盒说明书

一、原理

试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物喹诺***类药物和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗喹诺***类药物抗体,加入酶标记物后,用 TMB 底物显色,样本吸光值与其所含残留喹诺***类药物的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物喹诺***类药物的含量。

二、试剂盒特性 
 试剂盒灵敏度: 1ppb
 孵育温度: 25℃
 孵育时间: 30min~15min
 样本检测下限 

恩诺沙星(ENR)检测下限   1ppb

环丙沙星(CIF)检测下限  约 1ppb
氧氟沙星(OFL)检测下限  约 1ppb
达氟沙星(DAN)检测下限  约 1ppb
诺氟沙星(NOR)检测下限  约 0.5 ppb
洛美沙星(LOM)检测下限  约 1ppb
培氟沙星(PEF)检测下限  约 0.5ppb
依诺沙星(ENO)检测下限  约 1ppb
奥索利酸(OXO)检测下限  约 1ppb
氟喹酸 (FLU)检测下限  约 1ppb
麻保沙星(MAR)检测下限  约 1ppb
氨氟沙星(AMI)检测下限  约 1ppb
那氟沙星(NAD)检测下限  约 2ppb
  交叉反应率   
恩诺沙星(ENR)  100%
环丙沙星(CIF)  92.88%
氧氟沙星(OFL)  98.86%
奥索利酸(OXO)  116.86%



达氟沙星(DAN)  102.63%
诺氟沙星(NOR)  148.65%
洛美沙星(LOM)  86.24%
培氟沙星(PEF)  156.60%
依诺沙星(ENO)  98.97%
氟喹酸(FLU)  96.73%
麻保沙星(MAR)   110.63%
氨氟沙星(AMI)  98.86%
那氟沙星(NAD)  56.81%

样本回收率

组 织  80±15%
血 清  80±15%
蜂 蜜  75±15%
三、试剂盒组成   
   
1 微量测试孔 每条 8 孔,一板 12 条
    
 标准液×6 瓶 0ppb  1ppb
    
2  3ppb  9ppb
 (1ml/瓶)   
    
  27ppb  81ppb
    
    
3 酶标记物 7ml  红色帽
    
4 抗体工作液 7ml  蓝色帽
    
5 底物 A 液 7ml  白色帽
    
6 底物 B 液 7ml  黑色帽
    
7 终止液 7ml  黄色帽
    
8 20X 浓缩洗涤液 40ml  白色帽
    
9 2X 浓缩复溶液 50ml  透明帽
    

四、所用仪器、试剂

具备的仪器:微孔酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量 0.01g)

微量移液器:单道 20~200ul、单道 100~1000ul、

多道 250 ul

试 剂:浓盐酸、二氯甲烷、正己烷、乙*、

肝素钠、Na2HPO412H2O、 NaH2PO42H2O

五、样本前处理步骤

样本处理前须知

处理任何样本时,都必须注意:

(a)本试剂盒所检测的组织样本包括:动物组织、禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。

(b)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。

(c)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。

样本前处理需配制:

配液 1 0.1M HCL 溶液:

860l 浓盐酸加去离子水 100ml 溶解。

配液 2 乙*-二氯甲烷混合溶液:

V 乙*:V 二氯甲烷 = 1 : 4

配液 3 pH7.2 0.02M PB 缓冲液:

5.16g Na2HPO412H2O + 0.87g NaH2PO42H2O

加去离子水 1L 溶解。

配液 4 乙*-二氯甲烷-0.1MHCl 混合溶液

100ml乙*-二氯甲烷(V乙*:V二氯甲烷 = 4 :1)

混合溶液中加入 5ml 0.1M HCl 溶液。

配液 5 用去离子水将 2X 浓缩复溶液按 1:1 稀释

(1 份浓缩复溶液+1 份去离子水)用于样

本复溶。

(a)组织样本(鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)

1、称 2.0±0.05g 均质过的组织样本于 50ml 离心

管中;2、加入乙*-二氯甲烷混合溶液 8ml,振荡 5min,

4000r/min 以上,15℃离心 10min;3、取 4ml 有机相至干燥容器中,56℃氮气吹干/旋

转蒸发至干;4、用 1ml 稀释后的复溶液溶解干燥的残留物,加入

正己烷 1ml 混合 30s,4000r/min 以上,15℃离心 5min;

5、去除上层取下层 50l 液体用于分析。

样本稀释倍数:1

(b)血清样本的处理

1、用加有肝素钠(20-30 单位/ml 血)的离心管采集鸡血样本(建议采血注射器也用肝素钠润洗),血样本室温静置 1h,待析出血浆后 4000r/min 以上,15℃离心 10min,取出血浆 1ml;

2、加入乙*(无水)4ml 上下充分混合 5min, 4000r/min 以上,15℃离心 10min;

3、移上清至另一离心管中,加入 2ml 0.02M PB 缓冲液,混匀;


4、加入二氯甲烷 5ml,充分混匀 5min,4000r/min,

15℃离心 10min,去上层,取下层有机相到干燥瓶中(清亮无杂质),50℃旋转蒸发至干/氮气吹干;

5、用 1ml 稀释后的复溶液溶解干燥的残留物,加入正己烷 1ml 混合 30s,4000r/min 以上,15℃离心 5min;

6、轻吸掉上层和中间白色杂质,取下层相 100l

加入 100l 稀释后的复溶液,混合 30s;7、取 50l 用于分析。

样本稀释倍数:2

(c)蜂蜜样本处理方法:

1、取 2.0±0.05g 蜂蜜样本于 50ml 离心管中;加入 8ml 乙*-二氯甲烷-0.1MHCl 混合溶液, 充分振荡 3min,15℃ 4000r/min 以上离心 10min;

2、取 2ml 上清液于 56℃氮气或空气流吹干;

3、加入 1ml 的样本复溶液,充分震荡 1min;

4、取 50l 用于分析。

样本稀释倍数: 2 倍

六、 酶标免疫分析程序:

测定前应须知:

1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温

(20-25℃)。

2、 使用之后立即将所有试剂放回 2-8℃。

3、 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。

4、 所有恒温孵育过程,避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。

操作步骤:

5、将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25℃)平衡 30min 以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

6、按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔板重

新密封,保存于 2-8℃,不要冷冻。

7、配液:将 40ml 浓缩洗涤液(20 倍浓缩)用去离子水按照 1:19 稀释(1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。

8、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品均需做 2 孔平行,并记录标准


孔的样本孔所在的位置。

9、加标准品/样本 50l /孔,然后加酶标记物 50 μl/孔,再加入抗体工作液 50l/孔。轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板,25℃环境反应 30min。

10、 用洗涤液按每孔 250μl 洗板 4-5 次,每次浸泡 15-30 秒,拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。

11、 显色:每孔加入底物 A 液 50l 再加入底物 B 液 50l,轻轻振荡混匀,25℃环境避光显色

15min。

12、 测定:每孔加入终止液 50l,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于 450nm 处(建议用双波长

450/630nm 检测,在 5min 内读完数据),测定

吸光度值(OD 值)。

七、结果判定

结果判定有两种方法,粗略判定可用第 1 种方法,定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光度值与其所含喹诺***类药物量成负相关。

1、粗略判定:

用样本的平均吸光度值与标准品比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本 1 的吸光度值为0.238, 样本 2 的吸光度值为 0.946,标准液吸光度值分别是:0ppb 为 1.845; 1ppb 为 1.542;3ppb

为1.130; 9ppb 为 0.635;27ppb 为 0.326; 81ppb

为0.156。则样本 1 的浓度范围是 27ppb - 81ppb;

样本 2 的浓度范围是 3ppb - 9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹诺***类药物的实际浓度。
2、定量分析

(1)百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(0 标准)的吸光度值,再乘以 100%,即

B
百分吸光率(%)= ×100%
B0

B标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B00ng/ml 标准溶液的平均吸光度值

(2)标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标,以喹诺***类标准品


浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹诺***类药物实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。(欢迎来电索取)

八、 注意事项

1、 室温低于 25℃或试剂及标本未回到室温

(20-25℃)会导致所有标准的 OD 值偏低。2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会伴随着标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操

作。

3、 混合要均匀,否则会出现重复性不好的现象。

4、 反应终止液为 2M 硫酸,避免接触皮肤。

5、 不要使用过了有效日期的试剂盒;稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD 值变化;不要交换使用不同批号的盒中试剂。

6、 不用的微孔板放进自封袋重新密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。

7、 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。标准品 1 的吸光度值小于 0.5 时,表示试剂可能变质。

8、 该试剂盒最佳反应温度为 25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

1、 储藏条件:试剂盒于 2-8℃保存,不要冷冻。

2、 保 质 期:该产品有效期为 1 年,生产日期见包装盒。

提示:酶标板真空包装袋若有漏气,酶标板仍然正常有效,不影响实验结 

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