BC1180 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒-常用生化试剂-试剂-生物在线
BC1180  氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒

BC1180 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒

商家询价

产品名称: BC1180 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒

英文名称: Oxidized Glutathione(GSSG)Assay Kit

产品编号: BC1180

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联动U谷85A三层

品牌商标: solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒

品牌:Solarbio | 货号:BC1180
  • 英文名称 : Oxidized Glutathione(GSSG)Assay Kit
  • 别名 : 氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒 GSSG Kit 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测定试剂盒 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

 

 

 

 

 

商品货号: 商品品牌: 规格 基本售价: 选择规格
BC1180-50管/48样 Solarbio 50管/48样 320.00元

一、试剂盒组成:

试剂Ⅰ 液体 1 瓶 50ml(4℃保存)

试剂Ⅱ 液体 1 支 170 l(4℃保存)

试剂Ⅲ 液体 1 瓶 60ml(4℃保存)

试剂Ⅳ 液体 1 瓶 8ml(4℃避光保存)

试剂Ⅴ 粉剂 4℃保存,    用前 8ml 蒸馏水溶解

试剂Ⅵ 液体 1 支 4℃保存 用前 0.8ml 蒸馏水稀释

标准品 粉剂 1mg(4℃避光保存)

二、实验原理

氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘肽,是 两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG 会被谷胱甘肽还原酶还原成 GSH,因此机体中大多数是以 还原型方式存在。测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能够很好地反映细胞所 处的氧化还原状态。

本试剂盒利用谷胱甘肽能和 5,5’-二硫代-双-(2-**苯甲酸)(5,5’ -dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生 2-**-5-巯基苯甲酸,2-**-5-巯基 苯甲酸在波长 412nm 处具有最大光吸收的特点,通过 2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型 谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将 GSSG 还原为 GSH,借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。

三、实验仪器

分析天平、微量匀浆器(规格 2ml)、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、 Solarbio 1ml 比色皿。

四、操作步骤

1、样品的处理

组织处理 新鲜组织首先用 PBS 冲洗 2 次,然后称取动物组织或者植物组织 0.1g。加入用试剂Ⅰ润洗 过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷);然后加入 1ml 试剂Ⅰ(组织/试剂Ⅰ比例保持不变 即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);10000rpm 4℃离心 10min;取上清液 放置于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

血液处理

血浆:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心 10 分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等 体积的试剂Ⅰ, 4℃,8000g 离心 10 分钟,将上清移入新的试管中放置于 4℃待测,若暂时不 能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

血细胞:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心 10 分钟,弃去上层血浆用 3 倍体积的 PBS 清洗 3 次(用 PBS 重悬血细胞,600g 离心 10 分钟),加入等体积试剂Ⅰ,混匀后 4℃放置 10 分 钟,8000g 离心 10 分钟,吸取上清放于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可 保存 10 天)。

细胞处理

收集不少于 10 8个细胞,首先用 PBS 清洗细胞 2 次(PBS 重悬细胞,600g 离心 10 分钟),加 入 3 倍细胞沉淀体积的试剂Ⅰ重悬细胞,反复冻融 2-3 次(可在液氮中冻结,37℃水浴中溶 解),8000g 离心 10 分钟,收集上清于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可 保存 10 天)。

2、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

3、试剂Ⅱ放置 37℃(哺乳动物)或 25℃(一般物种)水浴中保温 30min。

4、标准品的稀释:将标准品用 1ml 蒸馏水溶解(4℃保存),浓度为 1mg/ml。取适当溶液配 制浓度为 25 g/ml、20 g/ml、12.5 g/ml、6.25 g/ml、3.125 g/ml、0 g/ml 的标准 品(试剂Ⅰ十倍稀释后进行稀释)。

5、取 1.5ml 离心管,加入 100 L 稀释好的标准品或样品,加入 2 L 试剂Ⅱ,混匀后 37℃ 孵育 30 分钟。

6、制作标准曲线 孵育完成后标准管依次加入 700μ L 试剂Ⅲ,100 μ L 试剂Ⅳ,100 μ L 试剂Ⅴ,10 μ L 试剂Ⅵ,迅速混匀后,测定 412nm 处 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2。吸光度(A2-A1)为横 坐标,浓度为纵坐标做标准曲线。

7、样品管依次加入 700μ L 试剂Ⅲ,100 μ L 试剂Ⅳ,100 μ L 试剂Ⅴ,10 μ L 试剂Ⅵ, 迅速混匀后,测定 412nm 处 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2。

五、GSSG 含量计算

将样品△A(即 A2 减去 A1)带入标准曲线公式,即可计算出每 0.1g 组织或相应血液、细胞 样品中氧化型谷胱甘肽的含量。

六、注意事项

1、样品处理需匀浆完全,若当天不能完成测量,可放-80℃保存。

2、若不确定样品中 GSSG 含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。

3、此方法利用酶促反应速率计算底物浓度,尽量准确在 30 秒和 150 秒处完成读数。

4、因为试剂Ⅰ中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

5、本试剂盒所配制的试剂除测定 48 个样品外,至少可做 4 次标准曲线。

 

相关文献:

《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影响因子:3.06 PMID:30301226