脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒  微量法

产品说明：
脯氨酸（Pro）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内 Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸（SA）提取 Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在 520nm 测定吸光度。需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：冰乙酸 4℃保存。（自备）
试剂二：液体 35 mL×1 瓶， 4℃保存。
试剂三：甲苯 4℃保存。（自备）
标准品：粉剂×1 支，脯氨酸 10mg，4℃保存。

操作步骤：
一、样品测定的准备：
1、细胞、细菌或组织样品的制备 ：
细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），之后置沸水浴振荡提取10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。
组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min，10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。
2、血清（浆）样品：取 100μL 血清（浆）加入 1mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取 10分钟，10000g，常温离心 10 分钟，取上清，冷却后待测。
3、标准品的处理：将标准品稀释为 15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 520nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、取 0.25mL 上清液或标准品溶液+0.25mL 试剂一+0.25mL 试剂二于 2mL 有盖 EP 管中，置沸水浴中保温 30min（盖紧，防止水分散失），每 10min 振荡一次。
3、待冷却后，加入 0.5mL 试剂三，振荡 30s，静置片刻，使色素转至试剂三中；吸取 0.2mL 上层溶液于微量石英比色皿或 96 孔板中，于 520nm 波长处比色，记录吸光值 A。
4、根据标准品吸光值和浓度，建立标准曲线。
三、Pro 含量计算：
1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y 为脯氨酸含量，μg/mL；x 为 OD 值)
2、按照细菌、细胞个数计算：细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)= y÷细胞浓度(104 cell/mL)
3、按照组织鲜重计算Pro 含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)
4、按照血清（浆）计算Pro 含量[μg/mL 血清（浆）] = y÷0.1mL 血清（浆）/mL
注意：提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定



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