emfret特约一级代理上海信裕生物科技有限公司

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产品名称: emfret特约一级代理
英文名称: emfret特约一级代理
产品货号: emfret特约一级代理
产品规格: 见官方网站
试剂级别: 分析纯
产品产地: 德国
产品商标: emfret特约一级代理
价    格: 询价
保存与运输: 见说明书
现货状态: 大量
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/12/11 12:32:00
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产品详细描述

 emfret特约一级代理

www.emfret.com 

 

德国一家主营二抗的公司,小鼠方面有世界专利,销售全球,很有实力的公司

jaq1 -分析GPVI综合抗体

jaq1单克隆抗体与血小板胶原受体GPVI的反应。一方面,它能抑制胶原诱导的小鼠血小板聚集,而交联的jaq1次级抗体诱导的血小板活化和聚集。

jaq1可用于免疫沉淀法、丙***固定的冰冻切片免疫组化分析,免疫荧光染色,而非还原条件下的免疫印迹分析。

小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析

-稀释或洗涤全血的制备

-洗涤小鼠血小板的制备

血小板表面糖蛋白表达的单色分析

血小板活化的双色分析

Immunohistochemistry(丙***固定冰冻切片)

免疫共沉淀

免疫印迹(免疫印迹分析)

小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析

顶部

缓冲液和试剂

Tris缓冲生理盐水/肝素(TBS / HEP):20 mm三/盐酸;氯化钠137毫米;pH值为7.3;含20 U/mL肝素。

***酸盐缓冲液(PBS):氯化钠137毫米;2.7毫米氯化钾;1.5毫米8毫米***酸二氢钾;***酸氢二钠;pH值为7.14。

台氏液(修改):氯化钠134毫米;0.34毫米2.9毫米氯化钾钠;碳酸氢钠;12毫米;20毫米hepes;pH值为7;5毫米葡萄糖;0.35%(W/V)牛血清白蛋白

Apyrase:10 U/ml的股票在h2obidest(存储在20°C)

前列环素(前列腺素2,PGI2):1毫米的股票在h2obidest(存储在20°C)

氯化钙:1米的股票在h2obidest

顶部

稀释或洗涤全血的制备

50µL血液肝素化玻璃毛细管(例如ringcap)从眼眶后静脉注入1.5毫升管含有200µL TBS /肝素(20 U / ml)。

´稀流的缓冲区,使用流式细胞仪分析1毫升。

准备洗血,离心稀释血在900 x g 5分钟,去上清,悬浮颗粒在1.25 mL灌流´缓冲。

在实验开始前直接添加1毫米氯化钙。

注意:对于凝血酶诱导的血小板活化,血浆必须除去,以防止凝血酶活性。

顶部

洗涤小鼠血小板的制备

冲洗血小板的制备是一种耗费时间较多的方法,需要大量的血液,但产生的血小板制剂可以使用几个小时。

收集0.5 - 1毫升血液1.5厘米的玻璃毛细管从眼眶丛成1.5毫升管含有200µL TBS /肝素(20 U / ml)。

离心样品5分钟,每次500克,然后将富含血小板的血浆(PRP)输送到新的试管中。为了获得最佳的血小板恢复,采取包括红细胞在内的全白相。

将血小板悬液离心8分钟,在300×g,然后把没有任何红细胞的PRP移植到新的试管中。

添加0.5µ前列环素(PGI2)和M 1300 x g离心5分钟。

血小板颗粒悬浮在1毫升Tyrode的缓冲液,加入0.02 U / ml和0.5µapyrase M前列环素,孵育5 min 37°C,并在1300 x g离心5 min

重复步骤5和血小板颗粒悬浮在0.5毫升的台氏缓冲液,加入0.02 U /毫升apyrase培育30分钟在37°C.

顶部

血小板表面糖蛋白的单色分析

结合5µL的特异性或阴性对照抗体和25µl稀释整体或洗1-2秒,涡旋混合法管血。

孵育15分钟室温。

停止反应,400µL PBS和分析在30分钟之内。

样品孵育用FITC标记的IgG(黑线),抗GPVI、或抗GPV的描述。血小板门控正向(FSC)/侧散射(SSC)的特点。荧光1(FL1)的门控强度(R1)的血小板在单独的直方图显示。红细胞。

顶部

血小板活化的双色分析

添加5µ具体的或负的检测管与5µl泛血小板标记抗体控制。

在这一点上,任何额外的试剂(如抑制剂)是在小体积的增加(<5µL)。

添加26µl稀释整体或洗血或洗涤血小板(100万)和涡流混合1-2秒。

孵育15分钟室温。停止反应,400µL PBS和分析在30分钟之内。

洗涤后的小鼠血小板与PBS(静息)或凝血酶(0.1 U / ml)结合FITC和PE共轭单克隆抗体孵育。血小板是由GPIX或GPIIbIIIa表达门控(FL1;门1)。

顶部

Immunohistochemistry(丙***固定冰冻切片)

请注意:不建议在(对-)甲醛固定样品上进行免疫染色,因为大多数鼠抗体在这些条件下对小鼠组织只产生很差的结果。

冰冻组织切片和幻灯片固定在冰冷的100%丙***在4°C.干标本在晚上在RT. 20分钟为了使试剂体积减到最小,可以用防水笔在幻灯片上的纸巾部分周围画一个疏水环。在所有后续程序中,这个环绕的区域不应该干涸。因此,建议在潮湿的盒子中进行孵化步骤。

PBS孵育20 min的幻灯片

当用过氧化物酶标记的二次抗体,室温孵育10分钟,用0.03%的H2O2抑制内源性过氧化物酶活性。在PBS中冲洗三次,每次洗涤5分钟。

 

幻灯片1小时孵化室温封闭解

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