克隆用T载体试剂盒

规 格：20μl
价 格：￥400
描 述：含T载体、连接酶预混液和鉴定引物，一步法完成基因克隆与表达载体的构建，所得到的阳性质粒载体可以直接用于表达。节约时间、节约成本。

克隆用T载体试剂盒

pBAT-1载体是高效克隆T载体，线性化载体3’-末端含有突出的碱基“T”，可以将3’-末端含有“A”的PCR扩增产物高效率的连接至pBAT-1载体上。本试剂盒中含有的高效连接液Ligation Mixture可以方便的将载体和外源片段进行高效连接，反应产物可以直接用于转化。

产品特色
一步法完成基因克隆与表达载体的构建，所得到的阳性质粒载体可以直接用于表达。节约时间、节约成本。

试剂盒成分
pBAT-7 （70 ng/μl）    20 μl     1支
Ligation Mixture        150 μl    1支
Plbu                    150 μl    1支
PNETR                   150 μl    1支

保存条件
保存温度：-20 ℃
有效期：12个月

使用方法
1、在微量离心管中配制以下DNA溶液，全量为5μl。

2、加入5μl的Ligation Mixture。
3、4℃反应过夜或者16 ℃连接2小时至4小时。将10 μl连接混合液加入100 μl感受态细胞中，冰水浴放置30分钟。
4、迅速置于42 ℃水浴热激2分钟，迅速在冰水浴放置2分钟。
5、加入900 μl 2YT（或LB）培养基，37 ℃，180 rpm振荡培养45分钟。高速离心收集菌体，去掉800 μl上清，留200 μl重悬细胞。
6、将200 μl细胞重悬液涂布在含有相应抗生素的琼脂平板培养基上，37 ℃倒置培养过夜，形成单克隆。挑取单菌落，鉴定阳性克隆。

注意事项
1、Ligation Mixture溶液请于冰水浴中溶解，混匀后再使用。
2、连接反应请在16℃以下进行，温度升高较难形成环状DNA。连接时间控制在4℃反应过夜或者16℃反应2小时至4小时。对于较难连接的反应，可以4 ℃过夜和16 ℃连接2小时交替连接。反应时间过短或者温度高较难筛选得到阳性克隆。
3、为提高克隆鉴定的效率，本试剂盒提供了载体上游引物和载体下游引物，以便于用菌落PCR鉴定阳性插入克隆时使用。也可用作测序引物。

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