M-MuLV逆转录试剂盒

规 格：200次（20μl体系）
价 格：￥1580
描 述：M-MuLV逆转录试剂盒含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。合成的1st Strand cDNA可广泛用于2nd Strand合成、杂交、PCR扩增、Real Time PCR反应等。

M-MuLV逆转录试剂盒

必拓生物生产的莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）逆转录酶是一种RNA介导的DNA聚合酶。该酶能以RNA（合成cDNA时）或单链DNA做模板，由引物起始合成一条互补的DNA。
本M-MuLV逆转录试剂盒含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。合成的1st Strand cDNA可广泛用于2nd Strand合成、杂交、PCR扩增、Real Time PCR反应等。

逆转录酶酶活力定义：以Poly (rA) 为模板、Oligo (dT) 为引物，在37 ℃条件下10分钟内催化1 nmol的[3H]-dTMP 掺入所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
M-MuLV逆转录酶浓度： 100 U/μL

质量检测
核酸内切酶残留：
在与酶使用环境完全相同的体系中，作用4小时，和对照相比，环状质粒DNA电泳带型无变化。
核酸外切酶残留：
在与酶使用环境完全相同的体系中，作用4小时，和对照相比，线性DNA电泳带型无变化。
酶活性：
以RNA为模板，转录cDNA活性明确，即以反转录的cDNA为模板，PCR扩增beta-actin活性良好。

用    途
⑴ 1st-Stand cDNA的合成；
⑵ cDNA Probe的制备；
⑶ RT-PCR反应以及Real Time RT-PCR反应。

使用方法
建立20 μL 的反应体系可以用于逆转录500 ng～5 μg总RNA或1 ng～500 ng mRNA。
 
1. 将以下组分加入无核酸酶的微量离心管中：

 
2. 轻柔混匀。65 ℃加热5分钟后迅速置于冰上冷却。短暂离心后加入以下组分：

 
3. 缓慢混匀。37 ℃反应60分钟。
4. 在70 ℃加热15分钟使逆转录酶失活以终止反应。
5. cDNA产物可以直接作为PCR的模板。如果扩增的PCR产物大于1 kb，则需要去除与cDNA互补的RNA。可以使用1 μL的E.coli RNase H在37 ℃孵育20分钟以去除与cDNA互补的RNA。