Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II

总SOD活力检测试剂盒II（比色法）

产品信息

产品描述

超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H₂O₂)和氧气(O₂)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。

目前有多种SOD活性测定方法，其中NBT（氮蓝四唑）法和细胞色素C法都是常用的检测方法。但WST-8法更为先进，稳定性更好、灵敏度更高。其基本检测原理是：

黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase)催化产生超氧化物阴离子，该超氧化物阴离子可以与WST-8反应产生水溶性的甲臜(formazan)产物，而SOD可以抑制上述反应。通过分析甲臜产物OD值，可计算SOD的酶活力。

检测原理图如下：

本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等多种生物样品中的SOD活性。按照试剂盒提供使用步骤操作，1个试剂盒可供100次检测。适合用于高通量筛选研究。

产品优势

1）WST-8反应产物是稳定的水溶性产物；

2）WST-8法可以通过检测单个时间点的吸光值测定SOD活力；

3）WST-8法测定时最大抑制百分率可以接近100%；

4）不受样品中过氧化氢的干扰，本试剂盒通过添加适量过氧化氢酶等特殊方法，有效去除常规样品中过氧化氢的干扰。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输。 -20℃保存，有效期6个月。【注】：WST-8溶液需避光保存。

注意事项

1）待测样品可-70℃保存一个月，避免反复冻融导致SOD部分失活；

2）细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液，会干扰检测；

3）抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。如果设置了使用说明中的空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1．样品的制备

① 细胞样品

1000-2000g，4℃离心10min收集细胞，预冷PBS或生理盐水洗涤1-2次。预冷PBS重悬细胞并于冰浴进行匀浆（可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器）。随后匀浆液1500g，4℃离心5min，取上清待测。

② 组织样品

动物解剖前用生理盐水（0.9% NaCl，含有0.16mg/mL肝素钠）灌流彻底清除红细胞及血块，取适量的组织样品，加入预冷的PBS于冰浴进行匀浆（可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器）。随后匀浆液1500g，4℃离心5min，取上清待测。

③ 血浆或红细胞样品

用抗凝管收集血液，颠倒混匀。4℃，600 g离心10min，移取上清至新的1mL离心管中，适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。红细胞样品可以参考步骤① 细胞样品的制备方法，或其他不含Triton X-100等去垢剂的样品制备方法。

【注】：a. 上述样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒（Yeasen 20201）测定蛋白浓度。通常10-20μg蛋白的细胞        或组织匀浆液样品中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作参考)。每种样品准备20-100μg蛋白量通常已经足够用于后续检测。

 b. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用本试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏组织10%匀浆液(组织和匀浆液的重量比为10%)上清，通常需要稀释10-100倍。

c. 准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，于-80℃冻存可保存至少1个月。但建议尽量当天完成测定。注意反复冻融会导致SOD部分失活。

2. 试剂盒的准备工作

① WST-8/酶工作液的配制

按照每个反应160μL的体积配置适量的WST-8/酶工作液。均匀混合151μL SOD检测缓冲液、8μL WST-8和1μL酶溶液，即可配置成160μL WST-8/酶工作液。根据待检测样品（包括标准品）的数量，配置适量的WST-8/酶工作液。配制好的WST-8/酶工作液4℃或冰浴保存，可以在当天使用，但建议尽量现配现用。

【注】：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。

② 反应启动工作液的配制

把试剂盒中的反应启动液(40×) 融解后混匀，按照每1μL反应启动液(40×)加入39μL SOD检测缓冲液的比例进行稀释，混匀后即为反应启动工作液。根据待检测样品(包括标准品)的数量，配置适量的反应启动工作液。配制好的反应启动工作液4℃或冰浴保存， 可以在当天使用，但建议尽量现配现用。

③ （可选）SOD标准品准备

需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至以下系列浓度：200U/mL，100U/mL，50U/mL，20U/mL，10U/mL，5U/mL，2U/mL。在随后的检测中可以各取20μL，参考样品进行检测。

【注】：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品需现配现用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。