乳酸(LA)含量检测试剂盒 可见分光光度法北京索莱宝科技有限公司--实验室产品

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性能参数

产品名称: 乳酸(LA)含量检测试剂盒 可见分光光度法
英文名称: Lactic acid (LA) content detection kit
产品货号: BC2230
产品规格: 50管/24样
产品产地: 北京
产品商标: solarbio
价    格: 840元
保存与运输: 2-8℃长期保存
现货状态: 现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2019/7/8 14:44:00
浏览人数:18
诚信指数:577点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
地址:
北京市通州区马驹桥联东U谷景盛南四街85A三层
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电话:
010-56371250
传真:
010-56371282
联系人:
马金成
所在区域:
北京·北京
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产品详细描述

 乳酸(LA)含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

产地:北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称:Lactic acid (LA) content detection kit
产品商标:
solarbio

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC2230
规格:50T/24S
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            
参考价格:840
库存状态:现货
关键词:乳酸含量检测|乳酸|LA|LA含量检测
产品内容:
提取液一:液体30mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体67μL×1瓶,4℃保存。临用前按试剂二(V):蒸馏水(V)=10μL:450μL的比例配制试剂二溶液,现用现配。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加入12mL蒸馏水充分溶解。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加12mL蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前每瓶加入8mL 蒸馏水混匀,可分装后-20℃保存,避免反复冻融。
标准品:粉剂×1支,4℃保存。临用前加入1.04mL蒸馏水配成100μmol/mL 的标准溶液。
显色液的配制:临用前根据用量按照试剂三(V):试剂四(V)=1:1的比例充分混匀,现配现用。

产品说明:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关,乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙tong酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+,H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质,在570nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。

操作步骤:
一、样本处理:
1. 组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.12mL提取液二,12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.12mL提取液二,12000g离心10min后取上清待测。
3. 血清(浆):取100μL血清(浆)加入1mL提取液一,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.12mL提取液二,12000g离心10min后取上清待测。

二、测定操作
1、分光光度计预热30min,波长调至570nm,乙醇调零。
2、标准液的稀释:将100μmol/mL 的标准溶液用蒸馏水稀释为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 μmol/mL标准溶液待测。
3、加样表:
测定管      对照管       标准管      空白管
样品(μL)        50          50           -           -
标准品(μL)      -            -           50          -
蒸馏水(μL)      -            -            -          50
试剂一(μL)     200          250          200        200
试剂二(μL)     50            -            50         50
显色液(μL)     300          300          300        300
试剂五(μL)     100          100          100        100
EP 管中充分混匀,于37℃水浴准确反应20min,于4℃,10000rpm 离心10min,去上清,留沉淀。
乙醇(μL)       1000        1000          1000       1000
充分溶解沉淀后,于570nm 处测定吸光值,分别记为A 测定管,A 对照管,A 标准管,A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管;ΔA 标准= A 标准管-A 空白管。

三、乳酸含量的计算:
1、标准曲线的绘制
以各标准溶液浓度为x轴,以其对应的吸光值(ΔA标准)为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程
y=kx+b,将ΔA测定带入公式中得到x(μmol/mL)。
2、乳酸含量计算
1) 按照蛋白含量计算
LA含量(μmol/mg prot)= x×V样品÷(V样品×Cpr)= x÷Cpr。
2)按照样本质量计算
LA含量(μmol/g 鲜重)= x×(V上清+V提取液二)÷ (W×V上清÷V提取液一)= 1.15×x÷W。
3)按照细胞数量计算
LA含量(μmol/104 cell)= x×(V上清+V提取液二)÷ (500×V上清÷V提取液一) = 0.0023×x。
4)按照液体体积计算
LA含量(μmol/mL)= x×(V上清+V提取液二)÷ [V液体×V上清÷(V提取液一+V液体)]= 12.65×x。

V样品:加入的样品体积,0.05mL。:
W:样本质量,g;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,蛋白浓度需自行测定;
V上清:提取时上清液体积,0.8mL;V提取液二:加入的提取液二体积,0.12mL;
V提取液一:加入的提取液一体积,1mL;
500:细胞数量,500万个;
V液体:液体样品体积,0.1mL。

注意事项:
1. 若测定吸光值超过1.2或ΔA大于0.8,请将样品体积进行适当的稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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