ATP含量检测试剂盒 微量法北京索莱宝科技有限公司--实验室产品

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性能参数

产品名称: ATP含量检测试剂盒 微量法
英文名称: ATP content detection kit
产品货号: BC0305
产品规格: 100管/96样
产品产地: 北京
产品商标: solarbio
价    格: 1560元
保存与运输: 2-8℃长期保存
现货状态: 现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2019/5/22 14:55:00
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诚信指数:565点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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北京市通州区马驹桥联东U谷景盛南四街85A三层
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传真:
010-56371282
联系人:
马金成
所在区域:
北京·北京
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产品详细描述

 ATP 含量检测试剂盒说明书

微量法

产地:北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称:ATP content detection kit
产品商标:
solarbio

注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0305
规格:100T/96S
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            
参考价格:1560
库存状态:现货
关键词:ATP含量检测|ATP含量|ATP|

产品内容:
提取液:液体100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入3.5mL 蒸馏水充分溶解,可加热促进溶解;
试剂三:液体4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前每支加入0.4mL 蒸馏水溶解,可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入1mL 蒸馏水;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入0.5mL 蒸馏水备用,可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。5mg ATP,临用前加入0.826mL 蒸馏水配成10μmol/mL 的ATP标准溶液。

产品说明:
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-***酸葡萄糖,6-***酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-***酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH 在340nm 有特征吸收峰,NADPH 和ATP 含量成正比,以此反应ATP 含量。

自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研钵/匀浆器、蒸馏水和氯仿。

操作步骤:
一、ATP 的提取:
1、血清(浆)中ATP 的提取:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议取约0.1mL 血清(浆),加入1mL 提取液),充分震荡,10000g,4℃离心10min;取上清液至另一EP 管中,加入500μL 的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

2、组织中ATP 的提取:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清至另一EP 管中,加入500μL 的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
3、细胞或细菌中ATP 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎1min(冰浴,强度20%或200W,超声2s,停1s),10000g 4 ℃离心10min;取上清液至另一EP 管中,加入500μL 的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

二、测定步骤:
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30 min 以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
2、将10μmol/mL 的ATP 标准溶液用蒸馏水稀释16 倍即0.625 μmol/mL 标准溶液备用。
3、工作液的配制:临用前请按试剂二(mL):试剂三(mL):试剂四(mL):试剂五(mL):试剂六(mL)=1:1:0.1:0.4:0.1 的比例配制,现配现用。
4、加样表
在微量石英比色皿或96 孔UV 板中加入:
试剂名称(μL)          测定管          标准管
样本                   20
标准液                                 20
试剂一                128             128
工作液                 52              52

充分混合后,立即测定340nm 下10s 的吸光值A1,然后将比色皿连同反应液一起放入37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴中反应3min,拿出擦拭干净立即测定其在3min10s 时的吸光值A2。用96 孔板则放入37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)培养箱中(酶标仪若自带控温功能,则将温度调至37℃或25℃)。分别计算ΔA 测定=A2 测定管-A1 测定管,ΔA 标准=A2标准管-A1 标准管

三、ATP 含量计算:
1、血清(浆)中ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×(V 提取+V 血清(浆))÷V 血清(浆)=6.875×ΔA 测定÷ΔA 标准
2、组织、细菌或细胞中ATP 含量计算
1) 按样本鲜重计算
ATP 含量(μmol/g 鲜重)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷W=0.625×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W
2) 按细菌或细胞密度计算
ATP 含量(μmol/106 cell)=ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷5=0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准

C 标准管:标准液浓度,0.625μmol/mL;
V 提取:加入的提取液体积,1mL;
V 血清(血浆):血清(浆)体积,0.1mL;
W:样本质量,g;
5:细胞或细菌总数,5×106 个。

注意事项
1、加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。
2、提取过程严格在冰浴条件下进行。
3、用微量石英比色皿测量的吸光值大于1.4 或者ΔA 测定大于1.2 时(石英96 孔板的吸光值大于1.4 或者ΔA 测定大于1.2 时),可以将样品稀释后进行测定。若吸光值小于0.01,则可以增加反应时间(5min 或10min)来测定,标准品需要增加同样的反应时间。

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