Cell counting KIT-8 (CCK-8)日本原装北京索莱宝科技有限公司

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性能参数

产品名称: Cell counting KIT-8 (CCK-8)日本原装
英文名称: Cell counting KIT-8(CCK-8)
产品货号: CK04
产品规格: 100T
产品产地: 瓶
产品商标: 日本同仁
价    格: 500元
保存与运输: 4℃密封避光保存,有效期一年。
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/8/2 8:26:00
浏览人数:12
诚信指数:1245点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

Cell counting KIT-8 (CCK-8)日本原装


别名WST-8

英文名称Cell counting KIT-8(CCK-8)

储存条件4℃密封避光保存,有效期一年。

产品简介

Cell Counting Kit-8 简称CCK-8试剂盒,为MTT法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验

使用说明

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。

3、接种后培养至细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值,

二、细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测

1、在96孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37 ℃,5% CO2的条件下)。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。

4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

6、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 活力计算:. 细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[ A(0加药)-A(空白)]×100 A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A(0 加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项

①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

②白细胞可能需要培养较长时间。

③当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10% 加入CCK-8溶液。

④如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度最高。

⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

CCK-8法与其它检测方法之间的比较:

细胞计数方法

MTT法

XTT 法

WST-1 法

CCK-8法

形成的formazan 的水溶性

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

无需预制

无需预制

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

 一般

较差

一般

很好

大批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

 

  

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