HiScript® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)

第三代高效cDNA 一链合成试剂盒（去基因组）

基于更高效的HiScript®III Reverse Transcriptase：逆转录效率高于二代产品

灵活选择引物： 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物

gDNA wiper Mix可迅速彻底去除基因组污染：保证后续结果更加可靠，并可简化qPCR引物设计，无需跨内含子设计引物

1.后续实验为PCR

以1μg  HeLa细胞RNA为模板，按照R302说明书推荐体系进行逆转录，以1μl cDNA为模板，用2 ×Vazyme Lamp® Master Mix (Dye Plus)（Vazyme #P312）进行长片段扩增，将得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示：扩增条带单一且产量高

图1.长片段扩增电泳图

注：M：DL15000 Marker(Vazyme #MD103)

2.后续实验为qPCR

以100 ng HeLa 细胞 RNA为模板，使用 HiScript® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R312) 以及市售其他逆转录产品 (分别来自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR定量分析。以不同公司产品为横坐标，△CT (△CT = Vazyme #R312 cDNA扩增CT值–各公司逆转录产品 cDNA 扩增CT值)为纵坐标绘图。从图中可以看出，除一些体系Th1△CT＞0外，其余公司逆转录产品均△CT＜0，说明 Vazyme #R312逆转录效率优于Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相关逆转录产品。

HiScript® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)的升级版本，包含新一代逆转录酶HiScript® III Reverse Transcriptase和针对逆转录优化的最适Buffer，进一步提高了一链合成的效率。该试剂盒中的5 × gDNAwiper Mix可在42℃，2 min条件下快速去除基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠，并可简化qPCR引物设计，无需跨内含子设计引物。试剂盒中包含单组分逆转录引物Oligo (dT)20VN和Random hexamers，用户可根据需要，灵活选择逆转录引物进行后续实验。本试剂盒既可合成用于克隆等下游实验的全长cDNA (可达20 kb)，亦可合成高度均一的用于qPCR定量的cDNA。

a. 包含dNTP

b. 包含RNase inhibitor