Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2上海前尘生物科技有限公司

性能参数

产品名称: Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2
英文名称: Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2
产品货号: 12614ES02
产品规格: 96×2 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 2753元
保存与运输: -20 oC
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/3/21 11:05:00
浏览人数:20
诚信指数:852点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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200030
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400-6111-883、021-34615995
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上海·浦东新区
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产品详细描述

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1

12613ES02

96×2 T

2753.00

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2

12614ES02

96×2 T

2753.00

产品描述

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,共分为2Set,每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8i5 Index Primer12i7 Index Primer 2Set共提供16i5 Index Primer24i7 Index Primer,配合Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®Cat#12201)使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12613ES02

PE Adapter

2×336 μL

i5 Index Primer 1-8

60 μL each

i7 Index Primer 1-12

40 μL each

12614ES02

PE Adapter

2×336 μL

i5 Index Primer 9-16

60 μL each

i7 Index Primer 13-24

40 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

注意事项

1)本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3)本试剂盒每个Set包含8i5 Index Primer12i7 Index Primer,可以构建96种不同组合的双端Index标记文库,每个Set可构建192DNA文库。2Set共提供16i5 Index Primer24i7 Index Primer。您可以使用Cat#12613中的i5 Index Primer(或i7 Index Primer)与Cat#12614中的i7 Index Primer(或i5 Index Primer)组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4

5)使用Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:

 

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。

接头连接(Adapter Ligation):

在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头,即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;

1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

推荐Adapter(15 μM)使用量

400 ng

30:1

3.5 μL

300 ng

40:1

3.5 μL

200 ng

60:1

3.5 μL

100 ng

100:1

3.0 μL

50 ng

100:1

1.5 μL

【注】:Input DNA 摩尔数(pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度(bp]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

3. 配制表2所示反应体系;

2. Adapter Ligation反应体系

名称

体积(μL

dA-tailed DNA

60

Ligation Enhancer

30*

Quick T4 DNA Ligase

5

PE Adapter

x**

ddH2O

5-x

【注】:*Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度(Cat#12611Cat#12612Cat#12613Cat#12614)与常规商业化试剂盒一致,皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示,计算接头用量

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

5. PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应:

3. Adapter Ligation反应程序

温度

时间

热盖

Off

20°C

15 min

4°C

Hold

【注】:Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的AdapterAdapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。

文库扩增(Library Amplification

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系;

4. PCR扩增反应体系

名称

体积(μL

2× Super Canace®High-Fidelity Mix

25

i5 Index Primer

2.5

i7 Index Primer

2.5

Adapter Ligated DNA

20

【注】:文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒(Cat#12611Cat#12612Cat#12613Cat#12614)。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

4. PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增

5. PCR扩增反应程序

温度

时间

循环数

98°C

1 min

1

98°C

10 sec

根据实验需要调整

60°C

30 sec

72°C

30 sec

72°C

5 min

1

4°C

Hold

-

序列信息

PE Adapter for Illumina

5′-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3′

5′-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3′

i5 Index Primer for Illumina

5′-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3′

i7 Index Primer for Illumina

5′-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3′

[i5 Index]表示8 bp i5 Index序列,[i7 Index]表示8 bp i7 Index序列,各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示:

i5 Index Primers名称

引物中Index序列

测序对应Index序列

i5 index Primer1

CTCTCTAT

CTCTCTAT

i5 index Primer2

TATCCTCT

TATCCTCT

i5 index Primer3

GTAAGGAG

GTAAGGAG

i5 index Primer4

ACTGCATA

ACTGCATA

i5 index Primer5

AAGGAGTA

AAGGAGTA

i5 index Primer6

CTAAGCCT

CTAAGCCT

i5 index Primer7

CGTCTAAT

CGTCTAAT

i5 index Primer8

TCTCTCCG

TCTCTCCG

i5 index Primer9

TCGACTAG

TCGACTAG

i5 index Primer10

TTCTAGCT

TTCTAGCT

i5 index Primer11

CCTAGAGT

CCTAGAGT

i5 index Primer12

GCGTAAGA

GCGTAAGA

i5 index Primer13

CTATTAAG

CTATTAAG

i5 index Primer14

AAGGCTAT

AAGGCTAT

i5 index Primer15

GAGCCTTA

GAGCCTTA

i5 index Primer16

TTATGCGA

TTATGCGA


 

i7 Index Primer名称 

引物Index序列

测序对应Index序列

i7 index Primer1

TCGCCTTA

TAAGGCGA

i7 index Primer2

CTAGTACG

CGTACTAG

i7 index Primer3

TTCTGCCT

AGGCAGAA

i7 index Primer4

GCTCAGGA

TCCTGAGC

i7 index Primer5

AGGAGTCC

GGACTCCT

i7 index Primer6

CATGCCTA

TAGGCATG

i7 index Primer7

GTAGAGAG

CTCTCTAC

i7 index Primer8

CAGCCTCG

CGAGGCTG

i7 index Primer9

TGCCTCTT

AAGAGGCA

i7 index Primer10

TCCTCTAC

GTAGAGGA

i7 index Primer11

TCATGAGC

GCTCATGA

i7 index Primer12

CCTGAGAT

ATCTCAGG

i7 index Primer13

TAGCGAGT

ACTCGCTA

i7 index Primer14

GTAGCTCC

GGAGCTAC

i7 index Primer15

TACTACGC

GCGTAGTA

i7 index Primer16

AGGCTCCG

CGGAGCCT

i7 index Primer17

GCAGCGTA

TACGCTGC

i7 index Primer18

CTGCGCAT

ATGCGCAG

i7 index Primer19

GAGCGCTA

TAGCGCTC

i7 index Primer20

CGCTCAGT

ACTGAGCG

i7 index Primer21

GTCTTAGG

CCTAAGAC

i7 index Primer22

ACTGATCG

CGATCAGT

i7 index Primer23

TAGCTGCA

TGCAGCTA

i7 index Primer24

GACGTCGA

TCGACGTC

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1(Cat#12613)引物组合方案

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Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® Set2(Cat#12614)引物组合方案

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i5 Idx

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接头类型

货号

名称

规格

价格(元)

短接头

单端

96 Index

12611ES02

Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®Set 1

48×2 T

1493

12612ES02

Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®Set 2

48×2 T

1493

双端

384 Index

12613ES02

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®Set 1

96×2 T

2753

12614ES02

Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®Set 2

96×2 T

2753

完整接头

12615ES04/16

Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1

12×4/

12×16 T

1256/4526

12616ES04/16

Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2

12×4/

12×16 T

1256/4536

12617ES04/16

Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3

12×4/

12×16 T

1256/4536

12618ES04/16

Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4

12×4/

12×16 T

1256/4536

Tn5接头

12610ES96

Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®(96 Index)

96 T

1365

 

HB190103

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