Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
英文名称: Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
产品货号: 10184ES50
产品规格: 50 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 245元
保存与运输: 冰袋运输
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2020/1/19 13:58:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)   

10184ES50

50 T

245.00

Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)  

10184ES70

200 T

565.00

产品描述

动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA,不需要除去蛋白、RNA等,即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外,样品使用量少,低至5 mg动物组织即可进行实验。

本试剂盒中提供的Tissue Master Mix(With Dye)具有很强的扩增兼容性,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化操作过程,降低污染几率。

该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等。

产品组分

类别

编号

组分

产品编号/规格

储存

10184ES5050 T

10184ES70200 T

Part I

10184-A

Buffer AL

5 mL

20 mL

室温或4℃

10184-B

Protease

220 μL

880 μL

4℃

Part II

10184-C

Tissue Master Mix(With Dye)a

500 μL

1 mL×2

-20℃

a2× Tissue Master Mix(With Dye)包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等,产品已混合溴酚蓝染料(不含SDS),PCR产物可以直接进行电泳。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

1. 试剂10184-ABuffer AL】,在常温干燥条件下,可保存12个月,如需保存更长时间可置于4℃。低温保存,易出现沉淀,可平衡至室温或37℃水浴10 min,待沉淀溶解后,混匀使用。

2. 试剂10184-BProtease】,具有独特配方,为保证其更好的活性和稳定性,建议4℃保存,切勿置于-20℃

3. 试剂10184-CTissue Master Mix(With Dye)-20℃保存,避免反复冻融。


操作方法

样品基因组DNA释放

1. 在离心管中加入100 μL Buffer AL4 μL Protease,轻轻涡旋混匀。

】:Buffer ALProtease混合后尽快使用,不宜长期保存。

2. 5-10 mg动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。

】:组织应尽量剪碎,以便酶解反应更顺利进行。

3. 65℃孵育10-30 min,然后95℃处理5 min

】:65℃孵育,一般10 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解,可将时间延长至30 min。组织块不需完全酶解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

4. 12000 rpm离心5 min

5. 将上清转移至新的离心管,4℃-20℃保存或直接用于PCR扩增。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

组分

体积(μL

体积(μL

终浓度

2× Tissue Master Mix(With Dye)

10

25

Forward Primer (10 μM)

0.5

1

0.2-0.25 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.5

1

0.2-0.25 μM

裂解产物(DNA模板) 

2

5

-

ddH2O

To 20

To 50

-

】:各组分使用前应充分混匀。

a模板使用量:建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%

b引物终浓度0.2-0.25 μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

c反应体系:推荐使用20 μL50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。

e对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

PCR反应鉴定——PCR反应条件

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

94℃

5 min

1

变性

94℃

10 sec

30-40

退火

50-65℃

20 sec

延伸

72℃

30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:a退火温度:请参考引物的理论 Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃

b延伸时间:需要根据片段的长度来确定,对于1 kb以内的DNA片段,建议延长时间为30 sec

注意事项

1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。

2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。

3. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率最佳。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


常见问题与解决方法

常见问题

可能原因

解决方法

阳性对照、待测样本均无条带。

PCR反应体系或反应条件不合适。

使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

PCR试剂保存不当失去活性。

2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。

引物设计问题。

尝试重新设计引物进行检查。

阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。

不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。

使用新鲜的试剂。

加入组织裂解液过量。

增大反应体系,或减少裂解液的用量。

样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR

模板加入量不适合。

在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。

PCR循环数不足。

适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。

非特异性扩增

PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。

增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。

PCR引物错配。

重新设计PCR引物。

配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。

PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。

阴性对照出现目的条带

操作工具或试剂污染。

实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

样本间交叉污染。

每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次**钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

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货号

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