Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)上海前尘生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
英文名称: Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
产品货号: 10185ES50
产品规格: 50T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 323元
保存与运输: 冰袋运输。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/6/2 14:19:00
浏览人数:7
诚信指数:853点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海前尘生物科技有限公司
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产品详细描述

 产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)  

10185ES50

50 T

323.00

Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)  

10185ES70

200 T

983.00

产品描述

本试剂盒可直接快速地对小鼠组织(如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等)样本进行PCR扩增,具有极强的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液,可以快速裂解样品,释放基因组DNA。裂解液可以直接加入到PCR反应体系中,无需精提纯化,操作方便。此外,本试剂盒对样品投入量要求低,5 mg小鼠组织或1-5 mm鼠尾即可进行实验。

本试剂盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix2倍浓度的热启动PCR反应液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化操作过程,降低污染几率。

该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

储存

10185ES5050 T

10185ES70200 T

10185-A

Buffer ML

1 mL×5

20 mL×1

-20或室温

10185-B

Buffer MT

0.6 mL

1.25 mL×2

-20

10185-C

Mouse Direct PCR Mix

500 μL

1 mL×2

-20

a) Buffer ML 为裂解缓冲液,包含了强力蛋白变性剂,请戴手套操作。

b) Buffer MT 为终止缓冲液,用以终止Buffer ML的裂解功能。

c) 2× Mouse Direct PCR Mix包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂、稳定剂和电泳指示染料等。

运输方法

冰袋运输。

保存方法 

1.组分A:20℃保存需解冻,待溶解后,可放置室温或4℃保存。长时间多次使用,请分装保存,以避免交叉污染。

2. 组分BC推荐-20℃保存,避免反复冻融。

操作方法

样品基因组DNA释放 

1. 剪取5-10 mg动物组织或1-5 mm鼠尾,置于1.5 mL离心管中;

2. 在上述离心管中加入90 μL Buffer ML,轻轻涡旋使得样品完全被裂解液浸润,短暂离心;

3. 在恒温孵育仪中设置95℃孵育15 min

4. 加入10 μL Buffer MT,轻弹混匀,终止裂解;

5. 选做步骤:12000 rpm离心2 min

6. 将上清转移至新的离心管,4-20保存或直接取上清用于后续PCR扩增。

 

】:组织应尽量剪碎,以便裂解反应更顺利进行。

】:95孵育,一般15 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难裂解,可将时间延长至30 min。组织块不需完全裂解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。


 

PCR反应鉴定——PCR反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2× Mouse Direct PCR Mix

10

Forward Primer (10 μM)

0.5

0.2-0.4 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.5

0.2-0.4 μM

裂解产物(DNA模板) 

1

-

ddH2O

补足至 20 μL

-

】:各组分使用前应充分混匀。

a模板使用量:建议按1-10%总体系量取用模板,20 μL体系建议采用1 μL上清液作为模板;

b引物终浓度0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度;

c反应体系:推荐使用20 μL,也可根据使用习惯调整体系体积大小;

d体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。

PCR反应鉴定PCR反应条件

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

94

5 min

1

变性

94

10 sec

35

退火

60

20 sec

延伸

72

30 sec/kb

终延伸

72

5 min

1

】:a退火温度:请参考引物的理论Tm值,退火温度可设置低于引物理论值 2-5

b延伸时间:请按30 sec/kb设定。

c扩增循环数35个循环已可以扩增足量产物。

d电泳上样:取3-5 μL扩增产物上样即可。

对照反应

PCR结果分析时,不管是阳性结果或阴性结果,如果没有对照反应,都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析,建议在进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

注意事项

1.为了避免样本间交叉污染,每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次**钠溶液中,反复洗刷数次进行清洗,然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便,也可准备多个取样器材,在使用完后进行统一清洗,确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。

2. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。

3. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率最佳。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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常见问题与解决方法

常见问题

可能原因

解决方法

阳性对照、待测样本均无条带

PCR反应体系或反应条件不合适。

使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

PCR试剂保存不当失去活性。

2× Mouse Direct PCR Mix应保存于-20,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4短时间存放。

引物设计问题。

尝试重新设计引物进行检查。

阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。

不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。

使用新鲜的试剂。

加入组织裂解液过量。

增大反应体系,或减少裂解液的用量。

样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR

模板加入量不适合。

在反应体系1-10%范围内优化模板加入量。

PCR循环数不足。

增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。

非特异性扩增

PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。

增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。

PCR引物错配。

重新设计PCR引物。

配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。

PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。

阴性对照出现目的条带

操作工具或试剂污染。

实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

样本间交叉污染。

每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次**钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

HB190227

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