细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒北京索莱宝科技有限公司--实验室产品

性能参数

产品名称: 细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒
产品货号: G3680-100T
产品规格: 100T
产品产地: 北京
产品商标: solarbio
价    格: 690元
保存与运输: ―20℃,避光,12个月
现货状态: 大量现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/6/9 12:08:00
浏览人数:57
诚信指数:579点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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产品详细描述

 


产品说明:

细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒(Hoechst Staining Kit)是一种采用经典的Hoechst33258进行细胞凋亡检测的快速简便的试剂盒。当细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白。Hoechst Staining Kit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1~1×106之间。

自备材料:

1、 可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜

2、 PBS或生理盐水

3、 载玻片、盖玻片

4、 预冷固定液:预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

 

操作步骤(仅供参考)

() 贴壁细胞

1、取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5min或更长时间,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或生理盐水洗涤3次,再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内,接种细胞培养过夜,使融合率约为50%~80%。

2、加入干预条件使细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入Hoechst固定液0.5ml,固定10min或更长时间(可4℃过夜)。

3、去除固定液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。

4、加入Hoechst 33258染色液0.5ml,孵育5min。也宜用摇床,或手动晃动数次。

5、弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。

6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片剂,尽量避免气泡。

7、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460nm左右。

 

()悬浮细胞

1、离心收集细胞样品于1.5ml离心管内并弃液,加入Hoechst固定液0.5ml,缓缓悬起细胞,固定10min或更长时间(亦可4℃过夜)。

2、低速离心去除固定液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min。洗涤时手动晃动数次。

3、低速离心离心后吸去大部分液体保留约50μl液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。

4、稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

5、滴加Hoechst 33258染色液0.5ml,孵育5min。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。

6、弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。

7、滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

8、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460nm左右。

 

()组织切片

1、常规包埋切片。

2、用PBS或生理盐水洗2次,每次3min。洗涤时手动晃动数次。

3、均匀滴上Hoechst 33258染色液0.5ml,孵育5分钟。

4、弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。

5、 将切片置于载玻片上,滴一滴抗荧光封片剂,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

6、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460nm左右。

 

注意事项:

1、 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。使用抗荧封片剂时也应避光操作。

2、 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。

3、 Hoechst 33258染色液对人体有一定刺激性,请注意适当防护。

4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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