F-TOP10 快速转化感受态细胞-克隆与表达-试剂-生物在线
F-TOP10 快速转化感受态细胞

F-TOP10 快速转化感受态细胞

商家询价

产品名称: F-TOP10 快速转化感受态细胞

英文名称: F-TOP10

产品编号: HZX17011

产品价格: 0

产品产地: 中国/上海

品牌商标: HZbscience

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

上海沪震实业有限公司
  • 联系人 : 鲍丽雯
  • 地址 : 上海市闵行区闵北路88弄1-30号第22幢AQ136室
  • 邮编 : 200612
  • 所在区域 : 上海
  • 电话 : 139****0749
  • 传真 : 021-60345367
  • 邮箱 : www.shzbio.net

 F-TOP10 快速转化感受态细胞

产品规格: F-TOP10 10×100μl pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Strr)endA1 nupG TOP10 菌株来源于 MC1061,是目前实验室最常用的感受态细胞之一,基因型与 DH10B 高度类似 (DH10B 为 galE15 型,而 TOP10 为 galU 型)。TOP10 生长速度快,37℃,10 小时可见克隆。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验。1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热 基 因 型 简 要 说 明 快速转化操作方法 (10min) 2. F-TOP10 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA(质粒或连接产物)并用 手拨打 EP 管底轻轻混匀,,冰中静置 5 分钟。3. 用 200μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 2YT 或 LB 培养基上。4. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养至少 13 h。1. F- TOP10 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用 手拨打 EP 管底轻轻混匀,,冰中静置 5 分钟。2. 42℃水浴热激 45 秒,迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB,37℃, 200 rpm 复苏 10 分钟,涂板 (均匀,表面无水渍)。3. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养至少 15h。1. F-TOP10 快速转化感受态细胞也可进行热激操作,对于>7 kb 质粒的构建,为了提高转化效率可按以下步骤操作: F-TOP10 感受态细胞从-80℃拿出,插入冰中,5 分钟后,加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,冰中静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒,迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB,37℃,200 rpm 复苏 30 分钟,涂板。 2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降 低转化效率,混入目的 DNA 时应轻柔操作。 3. F- TOP10 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,转化效 率下降(因无孵育步骤,卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率,可按热激转化操 作,增加孵育步骤。