Annexin V- Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Annexin V- Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒
英文名称: Annexin V- Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
产品货号: 40305ES20
产品规格: 20 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 386元
保存与运输: 4° 冰袋(wet ice)运输
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2020/1/19 13:58:00
浏览人数:43
诚信指数:916点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 产品信息

产品名称

货号

规格

价格(元)

促销价(元)

Annexin V- Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit  

Annexin V- Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

40305ES20

20 T

518.00

386.00

40305ES50

50 T

1120.00

786.00

40305ES60

100 T

1960.00

1346.00

产品描述

Annexin V-Alexa Fluor488/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit)是用Alexa Fluor488标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为:在正常的活细胞中,***脂酰丝氨酸(phosphotidylserinePS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KDCa2+ 依赖性***脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外,本试剂盒中还提供了***化丙***(Propidium IodidePI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin VPI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor488 PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40305ES2020T

40305ES5050T

40305ES60100T

40305-A

Annexin V-Alexa Fluor488

100 μL

250 μL

500 μL

40305-B

PI Staining Solution (20 μg/mL)

200 μL

500 μL

1.0 mL

40305-C

4×Binding Buffer

4 mL

10 mL

20 mL

运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。本试剂盒中所有组分均在4保存,Annexin V-Alexa Fluor488PI需避光保存。

注意事项

1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2)对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上***脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTAEDTA会影响Annexin VPS的结合。

3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

5Annexin V-Alexa Fluor488PI是光敏物质,在操作时请注意避光。


使用说明

1.1 样品染色

1. 悬浮细胞:300 g4离心5 min收集细胞。

贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g4离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

2. 配制1×Binding Buffer:用去离子水按1:4 稀释4×Binding Buffer4 mL 结合缓冲液+12 mL 去离子水)

3. 4℃预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300g4离心5 min

4. 加入250 μL 1×Binding Buffer重悬细胞,调节其浓度为1×106/mL

5. 100 μL细胞悬液于5mL流式管中,加入5μL Annexin V-Alexa Fluor 48810 μL PI,轻轻混匀。

6. 避光、室温反应15 min

7. 加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀,样品在1小时内用流式细胞仪检测。

注:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

1.2 流式细胞仪分析

Alexa Fluor488最大激发波长为488 nm,最大发射波长为519 nmPI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),Alexa Fluor488为横坐标,PI为纵坐标。每个样采集10000 events

1.3 荧光显微镜分析

1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。

2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。

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