Protein L Agarose Resin 蛋白L琼脂糖纯化树脂上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Protein L Agarose Resin 蛋白L琼脂糖纯化树脂
英文名称: Protein L Agarose Resin
产品货号: 36407ES08
产品规格: 5 mL
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 2488元
保存与运输: 冰袋运输。4℃保存
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/11/24 8:54:00
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诚信指数:900点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 Protein L Agarose Resin

蛋白L琼脂糖纯化树脂

产品信息

产品名称

产品编号

规格

Protein L Agarose Resin  蛋白L琼脂糖纯化树脂

Protein L Agarose Resin  蛋白L琼脂糖纯化树脂

Protein L Agarose Resin  蛋白L琼脂糖纯化树脂

36407ES08

36407ES25

36407ES60

5 mL

25 mL

100 mL

产品描述

翊圣Protein L Agarose Resin是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质,具体性能见产品性质。Protein L 经过基因重组,由大肠杆菌表达,保留了与抗体K链结合的特性,同时不会影响抗体的抗原结合位点。Protein Lprotein AProtein G 相比,更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体,包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡,但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。

产品性质

指标

性能

基质(Matrix

4%琼脂糖微球

配体(Ligand

重组蛋白L

孔径(Bead size

45-165 µm

最大流速(Flowmax

0.1 MPa,1bar

储存缓冲液(Buffer

20% 乙醇

载量(Capacity

15 mg human IgG/mL

pH范围(pH range

3-10

运输与保存方法

冰袋运输。4保存,2年有效。

需准备试剂

【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HClpH 8.5

 

 

 


使用方法

/

1样品纯化(以Akta系统为例)

1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3平衡:rProtein L Beads 装入合适的层析柱,5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4上样:将样品加到平衡好的rProtein L Beads中,推荐流速1ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如5-10倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4保存,防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

 2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗;

 5倍柱体积的PBSpH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

 3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗;

 5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗

注意事项

1请勿冷冻保存本产品。

2所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

3为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


 

附录1 常见问题与解答

问题

可能原因

推荐解决方法

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗填料

裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22 µm/0.45 µm滤膜过滤。

样品纯化过程中曲线不稳

样品或 buffer 中有气泡

赶出气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

使用其抗原做配体的介质

抗体被降解

适当的提高洗脱pH

回收率逐渐减低

上样量太多

减少上样量

柱子太脏,载量降低

清洗树脂

HB190527

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