Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit
英文名称: Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit
产品货号: 11147ES50
产品规格: 50 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 1453.00元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃避光保存。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/10/25 8:59:00
浏览人数:42
诚信指数:898点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

11147ES50

50 T

1453.00

Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

11147ES70

200 T

5493.00

产品描述

Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP BufferEnzymes MixHigh/Low ROX缓冲液中已含有Mg2+dNTP并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多达四重的反应。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11147ES50 (50 T)

11147ES70 (200 T)

11147-A

2×Hifair® V MP Buffer

500 μL

1 mL×2

11147-B

Hifair® V Enzyme Mix

50 μL

200 μL

11147-C

Hieff® 50×High Rox

20 μL

80 μL

11147-D

Hieff® 50×Low Rox

20 μL

80 μL

11147-E

RNase free ddH2O

500 μL

1 mL×2

【注】1) 2×Hifair® V MP BufferMultiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写 

2) Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse TranscriptaseUNICON® HotStart Taq DNA Polymerase

适用机型

High Rox适用机型 ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus

Low Rox 适用机型 ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P

不需要Rox校正的仪器型号

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

冰袋运输。-20避光保存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系(以20 μL为例)

组分

体积(μL

终浓度

2×Hifair® V MP Buffer

10

Hifair® V Enzyme Mix

1

-

Primer Mix (10μM)

0.4

0.2 μM

Probe Mix (10μM)

0.2

0.1 μM

Hieff® 50×High Rox/Hieff® 50×Low Rox

0.4

模板 RNA

Total RNA 1pg-1μg

-

RNA Free H2O

to 20 μL

-

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况0.1-1.0 μM进行调整。

b) 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制CT20-35之间适宜。

d) 反应体系推荐使用20 μL50 μL以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,使用无核酸酶残留的枪头、反应管推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染

f) 参比ROX: 本产品附带的ROX推荐20 μL体系中加0.4 μL,注意参比ROXProbe中的ROX信号会重叠,不可同时使用。

标准扩增程序

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50a

15 min

1

2

预变性

95

30 sec

1

3

扩增反应

95

10 sec

45

60b

30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录:对于一些复杂模板或者高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度调整至55℃,有利于提高扩增效率

b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物TM值进行调整。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

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