人白细胞介素-10 ELISA高灵敏试剂盒北京索莱宝科技有限公司

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性能参数

产品名称: 人白细胞介素-10 ELISA高灵敏试剂盒
英文名称: 分享到: Human IL-10(High Sensitivity) Elisa Kit
产品货号: SEKH-0018(HS)
产品规格: 96T
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
产品商标: solarbio
价    格: 3800元
保存与运输: 2-8℃
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/10/10 13:36:00
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诚信指数:1319点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

人白细胞介素-10 ELISA 高灵敏试剂盒

产品编号:SEKH-0018HS

适用于人血清、血浆或细胞培养上清液等样本

仅供研究,不用于临床诊断


背景介绍:

白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子,调节细胞的生长与分化,参与炎性反应和免疫反应,是目前公认的炎症与免疫抑制因子。在肿瘤、感染、器官移植、造血系统及心血管系统中发挥重要作用,与血液、消化、尤其是心血管系统疾病密切相关。在1989年,Mosmannand及他们的同事描述了一种新的免疫介质,由Th2细胞克隆分泌,能够抑制Th1细胞克隆IL-2IFN-γ的合成。早期被命名为细胞因子合成抑制因子(CSIF),这种因子后来被命名为IL-10,在这被发现的21年期间,很多研究深入剖析了这个细胞因子的生物学特性人类IL-10基因位于1号染色体上,包括总共5.1kb的序列包含5外显子IL-10基因的启动子中有很多的SNP位点,一些证据表明这些基因多态性在体外会影响IL-10的表达,IL-10基因由178个氨基酸组成蛋白质,分泌时会被切去18个氨基酸的信号肽,人类和鼠类的IL-10约有75%的氨基酸序列是一致的

 

检测原理

Solarbio (Solarbio ®) ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗人IL-10单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本,标准品和样本中的人IL-10会与酶标板上的包被抗体充分结合;洗板后加入生物素化抗人IL-10抗体,该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的人IL-10发生特异性结合;洗板后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合;洗板后加入显色剂底物TMB,若反应孔中样品存在不同浓度的人IL-10,则HRP会使无色TMB变成不同深浅(正相关)的蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄色;最后,在λmax=450 nmOD=450 nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),样本中的人IL-10浓度与OD成正比,通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人IL-10的浓度。

原理图:



注意事项:

1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。

2. 试剂盒未使用时应保存在2-8冰箱,已复溶未用完的标准品,请丢弃。

3. 试剂盒使用前在室温恢复30min且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持一致。

5. 为避免交叉污染,请在试验中使用1次性试管,枪头封板膜及洁净塑料容器.

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上,

使用前请离心处理(5-10 S即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用移液器小心吹打几次。

7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的

  试剂代替本试剂盒中的某单个组分。

8. 为保证结果准确,每次检测均做标准曲线。

 

安全提示:

试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时带上手套并注意防护;在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

试剂盒组成及储存

试剂盒组成

规格96T

规格(48T

保存条件

抗体预包被酶标板

 

8*12

8*6

2-8

标准品

2

1

-20

SR1标准品/样本稀释液

16ml/

8 ml/

2-8

浓缩生物素化抗体

120ul(100X)

60ul(100X)

2-8

SR2生物素化抗体稀释液

16ml/

8 ml/

2-8

浓缩酶结合物(避光)

120ul(100X)

60ul(100X)

2-8

SR3酶结合物稀释液

16ml/

8 ml/

2-8

浓缩洗涤液 (20×

30ml/

15 ml/

2-8

显色底物(避光)

12ml/

6 ml/

2-8

终止液

12ml/

6 ml/

2-8

封板胶纸

4

2

 

说明书

1

1

 

 自备实验器材(不提供,可代购)

1. 酶标仪(主波长450nm,参考波长630nm

2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3. 洗板机或洗瓶

4. 37℃

5. 双蒸水,去离子水,量筒等

6. 稀释用聚丙烯试管

 

样本收集及储存:

1. 细胞培养上清:

将细胞培养基移至无菌离心管,在4℃条件下1000 ×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并-20℃下保存24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融。

2. 血清样本:

室温血液自然凝固20 min后,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。

3. 血浆样本:

将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合20 min,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融

 

注意:血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的最高值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。

 

试剂准备

1. 试剂回温:首先在实验前30 min试剂盒,待测样本放置于室温,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入37℃ 温浴直到结晶全部溶解

2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将20浓缩洗涤液稀释成1应用液,未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释加入标准品/样本稀释液(SR11ml至冻干标准品中,静置15分钟待其完全溶解后轻轻混匀(浓度为2000pg/ml),然后按照以下浓度:40(20ul复溶好的标准品原液+980ul标准品稀释液)201052.51.250.6250pg/ml进行稀释,40pg/ml为标准曲线最高点浓度,标准品/样本稀释液(SR1)作为标准曲线的零点(0pg/ml)。复溶过的标准品原液(2000pg/ml未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20-80℃冰箱,具体如下





4.生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用检测稀释液(SR2100倍抗体浓缩液稀释1倍应用工作液(稀释前充分混匀30分钟内加入到反应孔中。

生物素化抗体工作液具体稀释方法如下:

板条

浓缩生物素化抗体1:100):μL

检测稀释液SR2):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

5. 酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将100倍浓缩酶结合物稀释成1倍应用工作液<, /span>稀释前离心),请在30分钟内使用

酶结合物工作液具体稀释方法如下:

板条

浓缩酶结合物1:100):μL

检测稀释液SR3):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

6. 洗涤方法:

自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为300ul/,

与吸出间隔为30秒,洗板5次。

手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液300ul/孔,静止30秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板5次。


检测步骤



结果判断

1.用酶标仪450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请用 450 nm OD测定值减去630 nmOD测定值。

2.计算标准品、样品的平均OD值:每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。

3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品IL-6含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度

4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数

 参数表征

1. 数据及标准曲线

标准品浓度(pg/ml)

OD1

OD2

平均值

矫正值

0

0.048

0.051

0.050

-

0.625

0.139

0.158

0.148

0.099

1.25

0.202

0.229

0.215

0.166

2.5

0.300

0.341

0.320

0.271

5.0

0.477

0.541

0.509

0.459

10

0.774

0.879

0.827

0.777

20

1.260

1.431

1.346

1.296

40

2.053

2.332

2.193

2.143

 

本图仅供参考,应以当次试验标准品绘制的标准曲线计算IL-10的样本含量

2. 灵敏度:

最低可检测IL-10浓度达0.3pg/ml

20个零标准品浓度OD的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。

 

 

3. 特异性:

不与人BMP-2 TGF-β2 TGF3TGF-a,小鼠BMP-3b BMPR-IAIL-1βBMPR-IBTGF-b RI等反应

4. 重复性:

板内,板间变异系数<10%

 

5. 回收率:

在选取的健康血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的IL-10,计算回收率。

样本类型

平均回收率(%

范围(%

血浆

92

87-97

细胞培养上清

96

91-101

 

6. 线性稀释

分别在选取的4份健康人血浆和细胞培养上清中加入高浓度IL-10,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。

稀释比例

回收率(%)

血浆

细胞培养上清

1:2

平均回收率(%

92

93

范围(%)

83-101

88-98

1:4

平均回收率(%

95

96

范围(%)

86-104

92-104

 参考文献

1. Hirano, T. et al. (1984) J. Immunol. 133:798.

2. Pestka, S. et al. (2004) Immunol Rev 202, 8-32.

3. Akuffo, H. et al. (1999) Clin Exp Immunol 117, 529-34.

4. Grimbaldeston MA, et al (2007). Nat. Immunol. 8 (10): 1095104.

5. OShea, J.J. and Murray, P.J. (2008) Immunity 28, 477-87.

6. Akdis, C.A. and Blaser, K. (2001) Immunology 103, 131-6.

7. Akdis, C.A. et al. (2000) FASEB J 14, 1666-8.

8. Von Stebut, E. (2000) Eur J Dermatol 17, 115-22.

9. Danielpour, D. et al. (1989) Growth Factors 2:61.

10. Danielpour, D. et al. (1993) J. Immunol. Meth. 158:17


常见问题及解决方法

问题

可能原因

解决方法

 

 

高背景或阴性对照值偏高

洗板不充分

将洗涤液注入反应孔充分洗涤,彻底拍干孔中液体

酶结合物过量

检查酶稀释度,按说明书标识的稀释度稀释

底物污染

加底物前检查底物是否为透明无色,勿用变蓝的底物,重新用新的底物试验

阴性对照孔被阳性对照污染

注意洗涤时不要把洗液溢出孔外,不使阴阳对照孔液体涟接一起

不同批次试剂混用

检查试剂批号,勿用不同批次试剂

 

 

 

显色信号弱

试剂过期

检查试剂盒有效期,请勿用过期试剂

孵育时间过短

按说明书中规定的时间孵育

试剂污染

检查试剂是否污染,请勿用污染的试剂

酶标仪滤光片不匹配

检查酶标仪设置及滤光片是否匹配

试剂盒平衡不充分

确保试剂盒试验前平衡至室温

显色时间不够

增加底物显色时间

 

 

无显色信号

检测抗体、酶、或显色剂漏加

检查试验操作流程,重复试验

酶被叠氮钠污染

使用重新配制的试剂

试剂添加顺序有误

检查复核试验添加顺序、流程,重复试验

标曲佳但样品孔无信号

样品中靶标物含量低或样品中无靶标物

设置阳性对照,重复实验

样品基质效应影响检测

重新稀释样品后复测

标曲佳但样品信号偏高

样品中待检物含量超过标准曲线范围

重新稀释样品后复测

边缘效应

孵育温度不均衡

孵育时每步均使用新的封板胶纸,避免在环境温度变化大的地方孵育,勿叠放反应板

 更多高灵敏elisa检测试剂盒请咨询公司业务员:13426459985





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