丙二醛(MDA)含量检测试剂盒

测定意义：氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。

测定原理：MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。

需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

说明书下载链接：http://www.solarbio.com/data/pdf/0_20190928baggsv.pdf

MDA 提取：

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照 400 万细菌或细 胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃ 离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织样品的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取 上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）：直接检测。

测定步骤：

1、可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，蒸馏水调零。

2、按下表步骤加样：

试剂名称                              测定管                 空白管
MDA 检测工作液（µL）         300                     300
蒸馏水（µL）                           -                        100
样本（µL）                             100                        -  
试剂三（µL）                          100                     100

混合液在 100℃水浴中保温 60min 后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温， 离心 10min。吸取 200µL 上清液于微玻璃比色皿或 96 孔板中，测定各样品在 450nm、532nm 和 600nm 处的吸光度。分别计算∆A450=A450 测定-A450 空白，∆A532=A532 测定-A532 空白，∆A600=A600 测 定-A600 空白。空白管只需做 1-2 次。

三、MDA 含计算：

a.按 96 孔板计算

1、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含计算

（1）按照蛋白浓度计算 MDA 含（nmol/mg prot）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)÷Cpr

（2）按照样品质计算 MDA 含（nmol/g 鲜重）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(12.9×(∆A532 -∆A600)-2.58×∆A450)÷W

(3) 按照细菌或细胞密度计算： MDA 含（nmol/104 cell）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷(400÷V 提取×V 样本) =0.125×(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)

（4）按血清（浆）体积计算： MDA 含（nmol/mL）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷V 样本 =5×(12.9×(∆A532 -∆A600)-2.58×∆A450)

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。 W：样品质，g；400：细胞或细菌总数，400 万；V 提取：提取液体积，1mL。

2、植物组织中 MDA 含计算

（1）按照样品质计算 MDA 含（nmol/g 鲜重）=(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)÷W

（2）按照蛋白浓度计算 MDA 含（nmol/mg prot）=(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)÷Cpr

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质，g；V 提取：提取液体积，1mL。

b.按微比色皿计算

1、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含计算

（1）按照蛋白浓度计算 MDA 含（nmol/mg prot）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷Cpr

（2）按照样品质计算 MDA 含（nmol/g 鲜重）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷W

(3) 按照细菌或细胞密度计算： MDA 含（nmol/104 cell）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷(400×V 样本÷V 提取) =0.0125×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450) （4）按血清（浆）体积计算： MDA 含（nmol/mL）=(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷V 样本 =5×(6.45×(∆A532 -∆A600)-1.29×∆A450)

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样品质，g；400：细胞或细菌总数，400 万；V 提取：提取液体积，1mL。

2、植物组织中 MDA 含计算

（1）按照样品质计算 MDA 含（nmol/g 鲜重）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)÷W

（2）按照蛋白浓度计算 MDA 含（nmol/mg prot）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)÷Cpr

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样品质，g；V 提取：提取液体积，1mL。

注意事项： 若发现检测样本吸光值过低，可以将沸水浴时间 60min 调整为 90min 或者更长，但同一实验中 的 MDA 的检测都需要延长到同一时间以免引起误差。

 文献引用

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