Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶
英文名称: Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶
产品货号: 11111ES92
产品规格: 10000 U
产品产地: china
产品商标: YEASEN
价    格: 1426元
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/10/25 8:56:00
浏览人数:23
诚信指数:906点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

第三代耐热逆转录酶

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶

11111ES92

10000 U

1426.00

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶

11111ES93

5×10000 U

4626.00

产品描述


Hifair
® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶,与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,其cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kbcDNA产品描述

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11111ES92 (10000 U)

11111ES93 (5×10000 U)

11111-A

5×Hifair® Ⅲ Buffer

250 μL

250 μL×5

11111-B

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

50 μL×5


产品应用

全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。


活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃10 min内,将1 nmoldTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制

核酸外切酶残留检测:200 U本酶和0.6 μg λDNA-Hind Ⅲ37℃下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200 U本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA37℃下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测:200 U酶和1 μg小鼠肝脏总RNA37℃下孵育1 hRNA电泳谱带不发生变化。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

注意事项

1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)


组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 ng/μL)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA:10 pg-500 ng 


65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ⅲ Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/μL)

1 μL


3. 逆转录程序设置


温度

时间

25℃

5 min

55

15-30 min

85℃

5 min

【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆转录温度:推荐使用55;对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60

3) 可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量

485℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCRqPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

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