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GsmartI T4 DNA Ligase苏州金唯智生物科技有限公司

性能参数

产品名称: GsmartI T4 DNA Ligase
英文名称: GsmartI T4 DNA Ligase
产品货号: GWC300
产品规格: 100ul/200ul/500ul
产品产地: 中国
产品商标: Genewiz
价    格: 350-1488元
保存与运输: -20℃
现货状态: 50
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2021/11/29 16:21:00
浏览人数:1330
诚信指数:1001点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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苏州金唯智生物科技有限公司
地址:
中国苏州工业园区科教创新区酝慧路8号
邮编:
215123
电话:
4008100669转6
传真:
0512-62629530
联系人:
金唯智
所在区域:
江苏·苏州
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产品详细描述

产品名称:GsmartI T4 DNA Ligase

货号:GWC300

浓度5 Weiss Unit

有效期:24个月

保存条件:-20℃

产品内容

产品组成

GWC300S

GWC300M

GWC300L

500 Weiss Unit

1000 Weiss Unit

2500 Weiss Unit

GsmartI T4 DNA Ligase

100 ul

200 ul

500 ul

2×T4 Quick Buffer

1ml

2ml

5ml

 

产品简介

GsmartI T4 DNA Ligase催化双螺旋DNA或RNA的3’端羟基和5’端***酸基形成***酸二酯键。该酶修复双链DNA、RNA和DNA/RNA杂合体中的单链缺口。连接粘性或平末端DN**段,GsmartI T4 DNA Ligase需要ATP作为辅助因子。

应用

  • 用于限制性内切酶酶切的DN**段的克隆;
  • PCR产物的克隆;
  • 连接双链寡核苷酸接头到DNA上;
  • 定点突变;
  • 扩增AFLP;
  • 连接酶介导的RNA检测;
  • 双螺旋DNA、RNA或DNA:RNA杂合体的缺口修复;
  • 线性化的DNA自连;

活性单位定义:

1个黏性末端连接单位(CEU):在16℃、30min内50%连接HindⅢ酶切的lambda DNA产物所需要的酶量。

CEU和Weiss Unit 存在下列转化关系:1 Weiss Unit = 200 CEU

储存液

20 mM Tris-HCl (pH 7.5),50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol

2×T4 Quick Buffer

80 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl2, 20 mM DTT, 1 mM ATP (pH 7.8 at 25℃).

抑制或失活条件:

  • 当NaCl或KCl的浓度大于200mM时强烈抑制GsmartI T4 DNA Ligase的活性。
  • 65℃10min或70℃ 5min可以使GsmartI T4 DNA Ligase失活

 

DNA与载体连接:

一、粘性末端连接:

1. 反应体系

Linear DNA

20-100ng

Insert DNA

1:1-5:1(插入片段:载体,molar ratio)

2×T4 Quick Buffer

10 ul

GsmartI T4 DNA Ligase

1 ul(5 Weiss Unit)

灭菌水

补水至20ul

2. 22℃孵育30min

3. 50ul化转感受态用5ul连接产物,50ul电转感受态用1-2ul连接产物

二、平末端连接:

1. 反应体系

Linear DNA

20-100ng

Insert DNA

1:1-5:1(插入片段:载体,molar ratio)

2×T4 Quick Buffer

10 ul

GsmartI T4 DNA Ligase

1 ul(5 Weiss Unit)

灭菌水

补水至20ul

2. 22℃孵育30min

3. 取5ul连接产物到50ul化转感受态;电转前纯化DNA,用纯化试剂盒或酚氯仿抽提,取1-2ul到50ul电转感受态.

注:如果连接产物用于电转,用柱纯化或酚氯仿抽提纯化DNA,代替热失活GsmartI T4 DNA Ligase.

以下方法可以提高电转效率:

  • 70℃ 5min或65℃10min加热失活GsmartI T4 DNA Ligase
  • 纯化DNA:用商业化试剂盒或酚氯仿抽提
  • 延长反应时间
  • 20ul反应体系中如果使用超过2 Weiss Unit的GsmartI T4 DNA Ligase,电转前需要纯化DNA(过柱或酚氯仿抽提)

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