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GsmartI T4 DNA Ligase

GsmartI T4 DNA Ligase

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产品名称: GsmartI T4 DNA Ligase

英文名称: GsmartI T4 DNA Ligase

产品编号: GWC300

产品价格: 0

产品产地: 中国

品牌商标: Genewiz

更新时间: null

使用范围: null

苏州金唯智生物科技有限公司
  • 联系人 : 金唯智
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产品名称:GsmartI T4 DNA Ligase

货号:GWC300

浓度5 Weiss Unit

有效期:24个月

保存条件:-20℃

产品内容

产品组成

GWC300S

GWC300M

GWC300L

500 Weiss Unit

1000 Weiss Unit

2500 Weiss Unit

GsmartI T4 DNA Ligase

100 ul

200 ul

500 ul

2×T4 Quick Buffer

1ml

2ml

5ml

 

产品简介

GsmartI T4 DNA Ligase催化双螺旋DNA或RNA的3’端羟基和5’端磷酸基形成磷酸二酯键。该酶修复双链DNA、RNA和DNA/RNA杂合体中的单链缺口。连接粘性或平末端DN**段,GsmartI T4 DNA Ligase需要ATP作为辅助因子。

应用

  • 用于限制性内切酶酶切的DN**段的克隆;
  • PCR产物的克隆;
  • 连接双链寡核苷酸接头到DNA上;
  • 定点突变;
  • 扩增AFLP;
  • 连接酶介导的RNA检测;
  • 双螺旋DNA、RNA或DNA:RNA杂合体的缺口修复;
  • 线性化的DNA自连;

活性单位定义:

1个黏性末端连接单位(CEU):在16℃、30min内50%连接HindⅢ酶切的lambda DNA产物所需要的酶量。

CEU和Weiss Unit 存在下列转化关系:1 Weiss Unit = 200 CEU

储存液

20 mM Tris-HCl (pH 7.5),50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol

2×T4 Quick Buffer

80 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl2, 20 mM DTT, 1 mM ATP (pH 7.8 at 25℃).

抑制或失活条件:

  • 当NaCl或KCl的浓度大于200mM时强烈抑制GsmartI T4 DNA Ligase的活性。
  • 65℃10min或70℃ 5min可以使GsmartI T4 DNA Ligase失活

 

DNA与载体连接:

一、粘性末端连接:

1. 反应体系

Linear DNA

20-100ng

Insert DNA

1:1-5:1(插入片段:载体,molar ratio)

2×T4 Quick Buffer

10 ul

GsmartI T4 DNA Ligase

1 ul(5 Weiss Unit)

灭菌水

补水至20ul

2. 22℃孵育30min

3. 50ul化转感受态用5ul连接产物,50ul电转感受态用1-2ul连接产物

二、平末端连接:

1. 反应体系

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