冻干Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

由于PCR对核酸的扩增效率极高，在诊断PCR实验中，非常容易造成移液器、台面、PCR仪、空气等气溶胶污染。当实验环境被污染后，会导致阴性样本的假阳性结果。本试剂中，将dNTP中的dTTP全部更换为dUTP，从而使得扩增后的PCR产物中包含dU碱基。在随后的实验中，含有气溶胶污染的dU PCR产物，将被本试剂中的UNG糖基化酶降解，从而去除了气溶胶的污染效应，本试剂中的UNG酶在37度孵育2分钟，即可消除高达10万个Copy的核酸污染物。因此，本制品是诊断定量PCR检测的最佳试剂。 冻干Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)是采用TaqMan探针法进行Real-Time PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针），其中冻干的TaqMan PCR Reagent将热启动Fast Taq DNA聚合酶、dNTP/dUTP、热敏UNG等做成冻干品试剂，制品性能稳定，可长期保存。当加入2×TaqMan Buffer溶解后，试剂变为常规TaqMan PCR单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、cDNA或DNA模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料，适合各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型。 制品中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满足快速PCR程序，通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。

组分

名称 200T×20μl Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent (UNG) 2 瓶 2×TaqMan PCR Buffer7 1ml×2

主要特征

热启动酶采用专有的修饰方式，30s热启动 引入UNG，可高效消除气溶胶污染 单组份预混液，使用方便快捷 冻干制品，性能极其稳定，适合长期保存 高灵敏度，可检测低丰度基因 适用于所有实时定量PCR仪器

应用

基因检测和基因诊断试剂开发。

储存

1. Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)为干粉形态，每瓶可用于100次的扩增反应。 2. Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)为干粉形态，可置于室温保存12个月，-20℃长期保存，并可采用室温运输。 3. 冻干制品经2×TaqMan PCR Buffer5溶解后，可于-20℃长期保存。

反应实例

Fig. 以pUC57质粒为模板，将该模板进行8个4倍稀释，第8个稀释梯度中模板拷贝数为10copy/μl,用Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)进行扩增检测，每个反应体系加模板2μl，如图所示，A：本制品在宽广的模板量区间内具有卓越的线性关系：扩增效率 97.5%，R2 =0.9995。 B：测试UNG去除DNA污染的能力，向反应体系中加入105copy的含dUTP的PCR产物，分别用普通冻干Fast DNA TaqMan PCR Reagent(B1)和Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)(B2)做定量PCR。从图中可以看出：UNG可很好的去除105copy 的气溶胶污染。C：图A扩增的标准曲线。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！