鸽新城疫病毒检测试剂盒（恒温荧光LAMP-TaqMan法）

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

鸽新城疫是由鸽源禽I型副黏病毒(（Pigeon Paramyxo Virus，PPMV）)引起的一种高度接触性、败血性传染病。PPMV I为单股负链RNA 病毒，全基因组长度约为15kB，编码6种主要的结构蛋白，其中F蛋白和HN蛋白为主要的免疫原性蛋白。该病发病急、传播快、死亡率高，因此早期快速的诊断对该病疫情的控制有重要意义。开发的基于恒温LAMP-TaqMan荧光扩增方法的鸽新城疫病毒检测试剂盒，以F蛋白靶标蛋白为F蛋白，可以鸽肉、血清/血浆、全血、排泄物、口腔拭孖等作为样本，制备RNA作为检测模板进行鸽新城疫病毒的检测，该试剂盒检测灵敏度极高，可检测至5copy，操作在15-30min内完成。

组份

规格 50T LAMP TaqMan Reagent 1瓶 LAMP Buffer 0.75 ml PPMV LAMP TaqMan Assay 1支 PPMV 阳性标准品（105 Copy/μl） 1支

储存

1. LAMP TaqMan Reagent、PPMV LAMP TaqMan Assay和 阳性标准品为干粉形式，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。 2. LAMP Buffer于-20℃可长期保存。

性能检测

1.以标准质粒为模板，进行鸽新城疫病毒检测试剂盒 LAMP TaqMan灵敏度检测 1-10：模板浓度为107 copy~2 copy，均可检测出，且NTC平线。该试剂盒灵敏度为~10 copy。

2. 抗干扰能力测试 1-3：单管反应中105 copy标准质粒，并加入0、50ng、100ng人基因组作为干扰，结果表明添加基因组后对灵敏度无影响。5-6：单管反应中无标准质粒，加入50ng和100ng人基因组，扩增结果无信号，表明鸽新城疫病毒特异性引物与人源基因序列无交叉，引物特异性良好。4：NTC，曲线平滑无扩增，表明引物特异性良好。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！