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T4 RNA连接酶1

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产品名称: T4 RNA连接酶1

英文名称: T4 RNA连接酶1

产品编号: HZ2703

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产品产地: 中国/上海

品牌商标: 沪震生物

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

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 T4 RNA连接酶1

描述:催化 3’→5’磷酸二酯键的形成,使核苷酸的 5’-磷酸末 端和 3’-羟基末端连接,伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作 用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸,它可催化 ssDNA 和 RNA 的连接,相对于 ssDNA,该酶对 RNA 分子 的连接和环化效率更高。 组分 名称 1000U T4 RNA Ligase1 (10 U/μl) 100 μl 10×T4 RNA Ligase Buffer 250 μl 10mM ATP 100 μl 50% PEG 8000 500 μl 应用  连接单链 RNA 和 DNA  RNA 3’末端标记  RNA 和 DNA 分子内和分子间连接  合成单链寡脱氧核苷酸  蛋白质中掺入非天然氨基酸 储存:-20℃可保存 3 年。 活性定义:1 单位指在 1×T4 RNA Ligase Buffer 中,37℃ 条件下,30 分钟内将 1nmol 的 5’-[ 32P]rA16 转化为磷酸盐不 溶物质所需要的酶量。 使用注意事项 (1)1×T4 RNA Ligase Buffer:50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl2,1 mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度 1 mM ATP。 (2)最佳反应温度 37℃,65℃ 10min 可使该酶失活。 (3)该酶的连接底物无论是 ssDNA 还是 ssRNA 均需要 5’- 磷酸化或预腺苷化。 (4)该酶不能连接双链 DNA 或 RNA。 (5)加入终浓度 5~10% PEG 8000 或增加孵育时间可提高 连接效率。 使用方法 1、ssDNA 和 RNA 的连接反应 (1)配制如下反应体系 (20 μl) RNA 或 ssDNA 底物 0.2-2 pmol 10 X Reaction Buffer 2 μl PEG8000 5~10% (wt/vol) T4 RNA Ligase 1 μl ATP( 10 mM ) 2 μl 灭菌水 upto 20 μl (2)37℃反应 30-60min,或 25 度反应 1-2h。 (3)65℃15min,终止反应。 2、RNA 环化反应 (1) 配制如下反应体系 (20μl) RNA 10 μM 10 X Reaction Buffer 2 μl PEG8000 5~10% (wt/vol) T4 RNA Ligase 1 μl ATP 20-50 μM Rnase inhibitor 0.5 μl 灭菌水 upto 20 μl (2)37℃反应 30-60min,或 25℃反应 1-2h。 (3) 65℃15min,终止反应。

T4 RNA 连接酶1催化3’→5’磷酸二酯键的形成,使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接,伴随着ATP水解为AMP和PPi。T4 RNA 连接酶1的作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸,它可催化ssDNA和RNA的连接,相对于ssDNA,该酶对RNA分子的连接和环化效率更高。 T4 RNA连接酶I

组分

组分名称 数量
T4 RNA Ligase1 (10 U/μl) 100μl
10×T4 RNA Ligase Buffer 250μl
10mM ATP 100μl
50% PEG 8000 500μl

应用

  • 连接单链RNA和DNA
  • RNA 3’末端标记
  • RNA和DNA分子内和分子间连接
  • 合成单链寡脱氧核苷酸
  • 蛋白质中掺入非天然氨基酸

活性定义

1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中,37℃条件下,30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

1.1× T4 RNA Ligase Buffer:50mM Tris-HCl pH 7.5,10mM MgCl2,1mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1mM ATP。
2. 最佳反应温度37℃,65℃ 10min可使该酶失活。
3. 该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。
4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。
5. 加入终浓度5~10% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。

 

 

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