JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

储存条件：

JC-1 -20℃避光保存，避免反复冻融。孵育缓冲液2-8℃保存。

有效期：

一年。

产品简介：

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；

线粒体损伤检测法

原理：细胞凋亡经常伴随有线粒体的损伤，而线粒体的损伤主要表现在：

(1) 线粒体外膜通透性增加，使位于线粒体外膜和内膜之间的膜间隙内的物质释放到细胞质中，其中最重要的是Cytochrome C，释放到细胞质中的Cytochrome C可以启动Caspase反应，从而启动线粒体接到的细胞凋亡。

(2) 线粒体膜电位下降,例如: JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Dye.

(3) 位于线粒体内膜上的心磷脂（cardiolipin）降解。

(4) 线粒体上7A6抗原的暴露。

未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。

染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。

方法/步骤
1.在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37，5%CO2的条件下)。

2. 向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。
3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12,24或48小时)。
4.向每孔加入10μlCCK8溶液（engreen）(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
5.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7.如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl0.1M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 

蛋白提取、纯化及检测：

蛋白检测系列包括品种齐全的蛋白分子量标准、ECL发光液、蛋白定量试剂盒。

蛋白纯化系列包括Ni柱等，可使蛋白得到简单、快速、高纯度的纯化。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！