产品描述

PEI 40000是一种分子量为40000的高电荷阳离子聚合物，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成复合物，并使该复合物进入细胞中。PEI 40000是一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高，在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等，转染效率高达80%~90%。

PEI 40000与PEI 25000转染试剂相比，具有很多优点。包括：1. PEI 40000较易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水调成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH调至中性；2. PEI 40000操作简便，更易于使用，且比PEI 25000的转染效果好；3. PEI 25000含有4-11%的丙酰基残留，其能阻止聚合物主链与DNA结合。相较于PEI 25000，PEI 40000是完全脱落的结构，因此其性能始终高效如一。

本产品为速溶型，溶解迅速，配制方便。

产品性质

运输与保存方法

运输方式：室温运输。
保存方式：粉末在室温或4 ºC保存，有效期2年。储存液 在4 ºC保存，有效期3个月。

注意事项

1）对大多数细胞来而言，每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用 1.5~4 μL体积线性PEI 40000转染试剂进行优化。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

3）本产品仅用于科研用途，不可用于人体。

储存液配置（1 mg/mL）

1.材料

PEI 40000、Milli-Q^® 水/注射用水（WFI）或类似的生物级水、1 mol/L氢氧化钠（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

配置储存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃烧杯，将1 g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q^®超纯水或其他相当级别的生物用水中，在磁子搅拌器上搅拌均匀。

2）待PEI 40000完全溶解（通常不到5 min）。

3）用氢氧化钠(1 mol/L)溶液调节pH为6.80 - 6.90。

4）将溶液转入量筒内，并加水定容到1 L。

5）用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液。

6）根据需要分装并储存在4 °C，3个月稳定。

转染操作流程（以6孔板为例）

1.接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。

2.准备DNA-PEI复合物：按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA，充分混匀成DNA稀释液。

【注】无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH₂O

2）立刻向100 μL的DNA稀释液中加入4 μL的PEI 40000转染试剂，轻轻混匀。

3）在室温下孵育10~15 min，使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

3.转染细胞：

1）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。

2）直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。

3）37 ℃，5% CO₂培养箱培养，转染后最快5 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

4.稳转筛选（可选）

转染24 h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），37 ℃，5% CO₂培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。使用时DNA（μg）: 试剂（μL）比值保持在1:0.5-1:5

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