【产品名称】

通用名称：炭疽杆菌检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Bacillus anthraci Detection Kit (Dual Channel Real-Time PCR Method)

【包装规格】 25T/盒 ＆ 50T/盒

【预期用途】

本试剂盒利用Taq-man实时荧光PCR原理，定性筛查检测炭疽杆菌，对疾病诊断、医治疗效及医院环境评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对炭疽杆菌基因设计特异性引物和探针，在反应体系中含有炭疽杆菌DNA模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

注：阴性对照为不含炭疽杆菌核酸的其它菌的混合物，阳性对照为炭疽杆菌经灭活处理的核酸提取物。

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1. 如使用原始标本进行检测，标本（脓液、血液、咽拭子、菌落、菌苔等）应为新鲜采集并使用双蒸灭菌水或灭菌生理盐水悬浮的原始标本。

2. 标本收集后若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-20℃～-80℃。

3. 标本保存期间应避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备（试剂准备区）

（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数

(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

(4) 盖紧PCR反应管盖后将PCR反应管和试剂盒中的DNA提取液转移至样本处理区。 剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。

2.样本准备（样本处理区）

用QIAGEN、Roche公司DNA提取试剂盒提取DNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。

或按以下方法操作：

a.取试剂准备区传递过来的DNA提取液，2000rpm 离心10s后备用。

b.取1ml标本自然沉降后的上清液加入到1.5ml无菌离心管中，12000rpm离心5min后弃上清，保留沉淀。

c.每管沉淀中加入DNA提取液50μL，将沉淀悬浮后100℃加热处理5分钟。

d.12000rpm离心5分钟，取上清进行PCR检测

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本DNA各5μl、终体积25μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。

4.PCR（PCR扩增区）

（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。

（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。