猪蓝耳病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)
产品名称: 猪蓝耳病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)
英文名称: Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
产品编号: YS310204
产品价格: 0
产品产地: 上海
品牌商标: 雅吉
更新时间: null
使用范围: null
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【产品名称】
通用名称:猪蓝耳病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)
英文名称: Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒 & 50T/盒
【预期用途】
本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测猪蓝耳病病毒,对猪蓝耳病病毒的诊断及疗效评估有重要指导意义。
【检验原理】
本试剂盒针对猪蓝耳病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含猪蓝耳病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
序 号 |
组成 |
50T/盒 |
1 |
PRRSV RT-PCR反应液 |
750 μL×1管 |
2 |
PRRSV逆转录酶 |
100 μL×1管 |
3 |
PRRSV Taq酶 |
150 μL×1管 |
4 |
PRRSV阳性对照 |
40 μL×1管 |
5 |
PRRSV阴性对照 |
40 μL×1管 |
6 |
说明书 |
1份 |
注:阴性对照为猪基因组DNA,阳性对照为失去活性的猪蓝耳cDNA。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1.血液或血清样品:使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。
2.肺脏、淋巴结和脾脏样品:取样本20 g,加少量灭菌PBS,用无菌研磨器研磨至糊状,再用4倍体积的PBS稀释成乳剂,8000 rpm 4℃离心10 min,取上清待检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.样本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃以下,避免反复冻融。。
【检验方法】
1. 试剂准备(试剂准备区)
(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数
单反液配制表(每份) |
RT-PCR反应液 |
15.0 μL |
逆转录酶 |
2.0 μL |
|
Taq酶 |
3.0 μL |
(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备(样本处理区)
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μL、终体积25 μL/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μL/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。
4.PCR(PCR扩增区)
(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。
(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
反应体积 |
25μL |
通道选择 |
FAM通道采集猪蓝耳病毒信号 |
PCR 反应 条件 |
步骤 |
条件 |
循环数 |
反转录 |
42℃:10分钟(min) |
1 |
|
预变性 |
95℃:3分钟(min) |
1 |
|
预扩增 |
95℃:5秒(s) |
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