cDNA 第二链合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 产生切口，再用 DNA Polymerase I 通过切口平移(nick translation)反应进行RNA 链取代合成 cDNA 第二链，

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，含有合成 cDNA 第二链的所有试剂（包括 RNase H、E.coli DNA聚合酶 1 和 DNA ligase。

2. 一管式操作，不需要每次进行纯化，不丢失宝贵的样品。

3. 所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。

本试剂盒足够 30 次 80uL 体系的 cDNA 第二连合成反应。

低温运输，-20℃保存，有效期一年

cDNA 第一链合成试剂等

一、合成 cDNA 第一条链

本试剂盒不提供 cDNA 第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成 cDNA

第一链。

二、合成 cDNA 第二链

1. 在冰浴上向 5uL 已经完成 cDNA 第一条链合成的反应体系（逆转录体系） 中依次加入下表试剂，如果多于 5uL，请只取用 5uL：

注：克隆双链 cDNA 一般需要平末端化，需要此步处理。PCR、SSH 等后续处理一般不需要把双链 cDNA 平末端化，则可以跳过T4 DNA 聚合酶处理步骤， 直接用 EDTA 终止反应。

1. 电泳 5 μL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范围内呈模糊一片，则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常，需查找原因后再继续。

2. 所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文库

构建、抑制性差减杂交（SSH）等实验