塞内卡病毒实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒-常用生化试剂-试剂-生物在线
塞内卡病毒实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒

塞内卡病毒实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒

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产品名称: 塞内卡病毒实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒

英文名称: HIV-2 Provirus PCR Kit

产品编号: Z59201

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产品产地: 中国

品牌商标: 雅吉生物

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使用范围: null

上海雅吉生物科技有限公司
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8反应体系应在特定配液区或者超净工作台中


【用途】本试剂盒采用实时荧光 RT-PCR 方法检测偶蹄动物水泡皮、水泡液及 OP 液中的塞尼卡病毒(SVV RNA,适用于 SVV 的检测、诊断和流行病学调查。

【原理】提取样品 RNA,在高效反转录酶的作用下,以 RNA 为模板,以引物为起点合成与 RNA 模板互补的 cDNA 链。在热启动 Taq 酶的作用下, 经高温变性、中温退火及延伸的循环,使特异

DNA 片段的拷贝数放大一倍,经荧光素标记的探针与扩增的 DNA 杂交,利用 Taq 聚合酶的 5→3 外切活性,使荧光探针的报告基团与淬灭基团分离,发出特异性荧光信号,利用荧光 PCR 仪检测特异性荧光信号,根据样品 Ct 值的大小及扩增曲线的形成情况判定结果。

【试剂盒组成】

 

【需要自备的器材】

1.试剂:核酸提取试剂。

2.仪器:离心机、荧光 PCR 扩增仪、-20℃冰箱、可调移液器2µL20µL 200µL1000µL)。

3.耗材:荧光 PCR 专用反应管、吸头(10µL

200µL1000µL)。

【使用注意事项】

1建议与世纪元亨提供的柱式 RNA 核酸提取试剂盒配套使用。

2实验过程中进行阴性对照和阳性对照样品的

质量控制。

3所有接触病料的物品均应合理处置,以免污染实验室。

4PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区模板提取区扩增

区。严禁器材和试剂倒流。

5所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化,8000rpm 离心

15s,使液体全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取, 使用后立即放回-20℃。

6注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。

7严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。

配制,整个实验过程严格控制污染。

9反复冻融试剂将降低检测灵敏度,本试剂盒应 次内用完。

【样品采集】

病死或扑杀动物,取水泡皮及水泡液;待检活动物,取 OP  2mL2℃保存,送实验室检测。要求送检病料新鲜,严禁反复冻融。

【实时荧光 RT-PCR 操作】

设被检样品、阴性对照和阳性对照总和为 N 则反应体系配制如下:

试剂 体系

无菌酶水 7N+1µL

RT-PCR  12.5N+1µL

酶混 1N+1µL

  荧光 2.5N+1µL

将以上配制的反应体系充分混匀后,分装每个反应管中各 23µL。分别取 2µL 模板 RNA,加入相应反应管中,混匀并作好标记,其中 SVV 光报告基团为 FAM,淬灭基团均为 None。在荧 PCR 仪上进行以下反应:42 ℃ min95 ℃ 10 s95 ℃ s60 ℃ 35 s,在每个循环第二步60

35s)收集荧光信号,共 40 个循环。

【结果判定】

结果分析条件设定

阈值设定原则:阈值线设定于刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。                         结果描述及判定

阳性对照 Ct ≤30 并出现特异性扩增曲线, 阴性对照无 Ct 值并且无特异性扩增曲线,实验结果成立;被检样品若FAM 荧光信号 Ct ≤30 出现特异性扩增曲线为 SVV 阳性;被检样品 30

Ct36 并出现特异性扩增曲线,需重新取样提 RNA,扩增后进行结果判定,如仍是可疑,可判定为阳性;被检样品 Ct 36 时,超过本方法检测灵敏度范围,判定为阴性;对于某些未呈现特异性扩增曲线,但本底较高的样品,判为阴性。

【规格】50 头份/

【保存及有效期】于-20℃以下保存,有效期为 12