产品描述
 
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 是一款能够准确检测支原体的试剂盒，可用于确定如细胞库、病毒种子、临床治疗用途的细胞和生物制品中是否存在支原体污染。本试剂盒基于定量PCR技术，使用Taqman荧光探针定性检测待测样本中支原体DNA，可覆盖100多种支原体DNA序列；并且严格按照EP 2.6.7和JP G3支原体检测相关指南和要求进行验证，具备灵敏度高、特异性好、扩增效率高、安全性好等特点。
本试剂盒中包含内部对照（IC），在扩增前加入PCR反应体系中，可用来判断待检样本中是否包含对扩增反应存在抑制的因素，从而达到防止假阴性结果的产生；内部对照（IC）也可在样本提取阶段加入，以评估提取效果。该试剂盒可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（Cat#18461ES）搭配使用，能够高效提取样本中的支原体DNA，检测限可达到10 CFU/mL，最高灵敏度可达0.5 CFU/mL。
 
产品组分
 
编号
组分
产品编号/规格
40618ES25 (25 T)
40618ES60 (100 T)
40618-A
4×MyqPCR Reaction Buffer
250 μL
1 mL
40618-B
MyPrimer & Probe MIX
25 μL
100 μL
40618-C
内部对照（IC）
25 μL
100 μL
40618-D
阳性对照（PCS）
500 μL
2 mL
40618-E
DNA稀释液
500 μL
2×1 mL
40618-F
超纯水
500 μL
2×1 mL
【注】：
1. 阳性对照（PCS）：Positive control solution，浓度为1,000 copies/µL;
2. 内部对照（IC）：Internal control;
3. DNA稀释液：用于样本和IC稀释、以及NTC和NCS的模板；
4. 超纯水：用于制备qPCR Mix体系。
 
运输储存方法
 
1. 干冰运输。试剂盒开封前，-20℃保存，有效期一年。
2. 初次使用时，建议将40618-C、40618-D分装后储存于-80℃，以减少反复冻融次数和避免污染。
3. 40618-A、40618-B、40618-E、40618-F保存于-20℃。
4. 收到货后，请检查各组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
 
注意事项
 
1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
2. 加样和配液步骤都尽量在冰上操作。
3. 每个组分在使用前都应震荡混匀，低速离心。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途。
 
适用机型
 
包含但不限于以下仪器：
Bio-Rad: CFX96
Thermo Scientific: 7500 Real-Time PCR System；QuantStudio™ 5；
 
实验设计
 
一、     待测样本DNA提取
建议使用Yeasen的“磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒”提取样本DNA，您可以在翌圣官网（https://www.yeasen.com）查询该产品的详细信息和购买该产品，产品货号为18461ES（手动提取）或18462ES（预装板，用于自动提取）。提取时，如需加入内部对照（IC），首先将试剂盒IC用DNA稀释液稀释20倍，每100 μL检测样本加入1 μL稀释后的内标后进行提取。
二、qPCR反应体系的准备
1. 根据所要检测样本的数量，包括阳性对照（PCS），无模板对照（NTC），抽提阴性对照（NCS）和待测样本（TS），计算所需反应孔数，一般每个样本做2个重复孔。
【注】：无模板对照（NTC）：No template control；抽提阴性对照（NCS）：Negative control solution；待测样本（TS）：Test sample。PCS和NTC为无需进行提取前处理的样本；NCS和TS为需要进行提取前处理的样本。
反应孔数（M）=（1×PCS + 1×NTC + 1×NCS + N×TS）×2
2. 根据表1反应体系，提前将所需试剂放置冰上融化。
3. 根据反应孔数计算所需要的qPCR Mix的量。