产品信息
 


    

        

            

            
产品名称
            
            

            
产品编号
            
            

            
规格
            
            

            
价格（元）
            
        
        

            

            
B-27 supplement Minus AO,serum free,50X  B-27无血清添加剂，无抗氧化剂，50X
            
            

            
60705ES10
            
            

            
10mL
            
            

            
1475
            
        
    


 
产品描述
 
B-27是一种最常被引用的神经细胞培养添加剂，是一种优化的无血清添加剂，用于支持胚胎、出生后和成年海马神经元和其他中枢神经系统（CNS）神经元的生长和活性维持。B-27无血清添加剂以50倍工作液提供，旨在与神经基底培养基一起使用，神经基底培养基用于神经细胞培养，无需星形胶质细胞饲养层。
在神经元基础培养基中使用B-27添加剂，用于培养产前和胚胎神经元，以获得优化的活性和长期的存活率。
在神经元基础培养基中使用B-27添加剂，用于培养神经来源的肿瘤细胞系，可有效地保证其活性。
在DMEM/F12培养基中添加B-27添加剂，已被证明可支持扩增来自小鼠胚胎纹状体和中脑的EGF响应性的前体细胞。
本产品从标准配方中去除了全部5种抗氧化剂，以利于在氧化应激及损伤、氧自由基对神经损伤和凋亡的研究中排除抗氧化剂的干扰。
本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养。
 
产品性质
 


    

        

            

            
中文名称（Chinese Name）
            
            

            
B-27无血清添加剂，无抗氧化剂，50X
            
        
        

            

            
英文名称（English Name）
            
            

            
B-27 supplement Minus AO,serum free,50X
            
        
        

            

            
外观（Appearance）
            
            

            
淡粉色澄清液体
            
        
    


 
运输和保存方法
 
干冰运输。-30 ~ -5℃保存，24个月有效。
 
使用方法
 
1.完全培养基制备
置于4°C解冻本产品。
在使用前无菌添加2%本产品和0.5 mM L-谷氨酰胺至神经元基础培养基，配制成神经元完全培养基（注：下文中出现的“神经元完全培养基”即指此种添加了B-27添加剂和L-谷氨酰胺的神经元基础培养基）注意：剩余的本产品可以等分成工作体积，并储存在-30 ~ -5℃。在以后的试验中根据需要解冻相应体积的本产品。避免反复冻融。
对于原代海马神经元培养，神经元完全培养基（由前述步骤制备）需要额外补充25 μM的L-谷氨酸，在培养的第4天以后的换液中应不再添加谷氨酸。配置好的完全培养基，可于2-8℃的避光保存一周。
2.细胞培养步骤
下列步骤已在大鼠胎儿原代海马和皮层神经元，以及神经母细胞瘤细胞系中测试。
用无菌的冷的0.05 mg/mL多聚赖氨酸水溶液包被培养表面(玻璃或细胞培养级塑料)，每平方厘米表面使用0.15 mL，在室温下保温1 h。
去除多聚赖氨酸溶液，并用无菌蒸馏水冲洗两次(须彻底清洗，因为多聚赖氨酸对细胞有毒性)。在超净工作台中打开培养板的盖子通风，直到每个孔都完全干燥。培养板干燥后可以立即使用或在4°C最多保存2周。
根据标准实验室程序或随细胞提供的说明书分离原代的大鼠神经元或解冻冻存的原代大鼠神经元。
在预热的(37°C)神经元完全培养基中（如前所述的方法制备)接种细胞，建议的细胞密度为160个细胞/mm2，或必要时使用自行优化的细胞密度。注意：对于海马神经元，培养基中须添加25μM L-谷氨酸，参见“完全培养基的制备”。
在36°C至38°C，含5%二氧化碳的潮湿环境中培养（使用自然空气也是可接受的，但推荐含9%氧气和5%二氧化碳的气体环境）。
培养4-24小时后，更换一半体积的新鲜培养基，继续在培养箱中培养。
对海马神经元以外的细胞：在接种4天后，更换一半体积的新鲜的完全培养基，之后每三天重复一次。对海马神经元：接种三天后，用不含L-谷氨酸的新鲜培养基更换一半体积的培养基。之后每三天重复一次。注意：在完全培养基中添加25 µM 2-巯基乙醇，可改善海马神经元的长期存活率。
3.分离原代大鼠胚胎神经元
下列程序推荐用于培养受精18天的大鼠胚胎海马神经元和大脑皮层神经元。
从受精18天的大鼠胚胎中分离大脑皮层和双侧海马
在预置了Hibernate-E完全培养基的锥形管中收集所有的组织。放置，直到所有的组织都已解体。
使组织沉积在管的底部，然后小心地去除上清液，只留下刚好可覆盖组织的最少量的培养基。
在不含钙离子的Hibernate-E培养基中，使用2 mg/mL过滤灭菌的木瓜蛋白酶溶液，在30°C酶解组织大约30 min，其间每5 min轻摇锥形管以帮助降解。每对海马组织使用2 mL酶溶液。
加入两倍体积的Hibernate-E完全培养基以恢复二价阳离子的浓度，停止酶解。
使未解离的组织沉降至管底（约2 min），然后把上清液转移到15 mL离心管中，以150×g离心5 min。
在1 mL神经元完全培养基中重悬沉淀物，取一小份(例如10 μL)进行细胞计数。后续的操作按照“复苏和