本试剂盒仅供科研使用

有效期： 6 个月

【实验准备】

1. 请仔细阅读使用说明书，中文说明书仅供参考，请以英文说明书为准；

2. 标准品的梯度稀释以及浓缩稀释液的稀释方法详见英文说明书；

3. 根据实验设计安排板条数，推荐设计复孔；

4. 实验前请将试剂盒平衡至室温。

【操作步骤】

1. 加 样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。每孔加样 100 μL 。覆膜后 37 ℃ 反应 40 分钟；

( Standard 的稀释请严格按照英文说明书中稀释方法进行；标准品及样品的稀释均使用 Diluent Buffer 稀释 )

2. 洗 涤：甩弃反应液，注满洗涤液并振荡洗涤 30 秒，洗涤 5 次，并于吸水纸上拍干；

3. 每孔加入 Enzyme Conjugate Reagent 工作液 100 μL 。覆膜后 37 ℃反应 40 分钟；

4. 洗 涤：同步骤 3 ；

5. 显 色：每孔依次加入 Color Reagent A 和 Color Reagent B 各 50 μL 。 至 37 ℃避光显色 10 分钟（请勿覆膜）；

6. 终 止：每孔加入 Stop Solution 50 μL 终止反应（此时蓝色立即转黄色）；

7. 用酶联仪在 450 nm 波长下测量 OD 值；

【结果计算】

以标准品的浓度 (pg/mL) 为横坐标， OD(450) 值为纵坐标，绘制出标准曲线。根据样品的 OD(450) 值由标准曲线计算出相应的浓度；再乘以稀释倍数即可得到样品中 AFP 的实际浓度。

推荐计算软件： Microsoft Office Excel2003(2007) 、 CurveExpert 1.3 、 SPSS 系列。

【注意事项】

1. 试剂准备均需混匀，尽量避免产生气泡；

2. 加样时垂直加入之酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；

3. 洗涤过程对于取得良好的实验结果至关重要；

4. 不同试剂盒内的试剂严禁混用。