流式分选/流式检测细胞凋亡/流式检测细胞周期威斯腾生物

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技术服务信息

服务名称:流式分选/流式检测细胞凋亡/流式检测细胞周期
服务类别:细胞生物学服务 - 流式细胞检测服务
价格:欢迎来电详询023-65316016,023—65316556
允许参观:允许参与实验
所在区域:重庆.重庆
更新时间:2019/11/18 11:44:00
浏览人数:2065
服务商:威斯腾生物
诚信指数:1716点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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威斯腾生物
地址:
重庆高新区生物医药研发产业园D栋
邮编:
400039
电话:
4006756758
传真:
023-65316016
联系人:
张老师
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重庆·重庆
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技术服务详细描述


流式分选/流式检测细胞凋亡/流式检测细胞周期


式分选

流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体,它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状, 还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。

服务内容:

淋巴细胞、造血干细胞、内皮细胞和成纤维细胞等多种细胞的分选。

客户须知:

客户须按流式细胞分选要求制备细胞样品,保证实验样品的绝对无菌,并同时提供阴性对照样品。

客户在提交样本前,需附详细书面说明材料,说明实验目的、样品来源及处理方法等信息,并详细说明检测要求。

 

流式细胞术检测细胞凋亡 

操作步骤
1、用预冷的PBS洗涤细胞两次,之后用1X的结合缓冲液重悬细胞, 调节细胞浓度到1X106Cells/ml;
2、取100μl调节好浓度的细胞悬液到5ml流式管底部;
3、加入Annexin V标记蛋白和相应的核酸染料(标记的Annexin V与核酸染料均需要摸索到合适的使用浓度,商品化试剂盒按照说明书操作);
4、均匀混合,室温避光反应15分钟;(若是用Annexin V-Biotin标记蛋白染色,反应后用1X的结合缓冲液洗涤细胞一次,再加入合适浓度的标记链霉亲和素Streptavidin,再加入合适的核酸染料,室温避光反应15分钟)
5、向流式管中加入400μl 1X的结合缓冲液,重悬后及时上流式细胞仪进行分析.操作注意事项

1、补偿对照管很重要;
2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞;
3、细胞浓度与染色用的蛋白量要合适;
4、对不同药物浓度和药物作用时间要进行摸索;

仪器:

实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。

样本要求

1)单个细胞:1~2×106 个细胞左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。

2)外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。

 

流式细胞仪进行细胞周期检测(PI)

细胞周期的定义
生命是从一代向下一代传递的连续过程,因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成,或是细胞的自身死亡。通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。在这一过程中,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。
1)PI单染色的固定方法:
1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。
2.3ml PBS洗一次。
3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。
4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。
5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心5min,弃去PBS。
6.用1ml PI染液,4℃避光30min。
7.流式细胞仪检测:PI用氩离子激发荧光,激发光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光,可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。

2方法:
将样品细胞按程序描述的方法用FITC标记的单克隆抗体进行单色染色。
A、在最后的洗涤步骤后,将样品细胞悬浮于PI缓冲液中,于4℃下密封避光保存以备通过流式细胞仪分析;
B、在最后的洗涤步骤后,如前述将样品细胞悬浮后备用。如果您想检测样品细胞活力,在每一管中加入2μl的PI浓缩液,混匀。将样品置于4℃下密封避光保存以备流式细胞仪分析。

威斯腾实验服务流程


威斯腾生物服务项目

分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
BioPlex悬浮芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
生长因子芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
炎症因子芯片软骨细胞培养体内血栓模型
血管生成因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
凋亡因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片基因编辑动物
电生理相关服务动物整体实验服务
膜片钳实验
细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测

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